[发明专利]一种动物核酸疫苗的大规模生产技术

权利要求书

1.一种核酸疫苗的生产方法，包括如下步骤：

（1）将重组菌在发酵罐中进行分批发酵培养，培养至碳源全部消耗后，加入补料溶液进行补料，当发酵液OD₆₀₀值为50-100时，分阶段提升培养温度至37-42 ℃，再培养8-9小时后，得到发酵后菌体；

（2）使用超滤系统将所述发酵后菌体进行裂解纯化，得到核酸疫苗；

所述步骤（1）中，所述重组菌为将含有编码某种抗原蛋白的外源基因的质粒导入宿主菌中得到的菌；所述重组菌的OD₆₀₀值为2-3；所述宿主菌为大肠杆菌；

所述重组菌加入发酵罐前还包括离心的步骤，所述离心后的菌液与所述发酵罐内的发酵培养基的体积比为1:1；

所述发酵罐中的发酵培养基由甘油、磷酸二氢钾、磷酸氢二铵、酵母提取物、氯化钠、微量元素溶液、七水硫酸镁、氨芐青霉素、硫胺素盐酸和水组成；

所述甘油在所述发酵培养基中的浓度为（20-30）g/L；

所述磷酸二氢钾在所述发酵培养基中的浓度为13.3 g/L；

所述磷酸氢二铵在所述发酵培养基中的浓度为4 g/L；

所述酵母提取物在所述发酵培养基中的浓度为4 g/L；

所述氯化钠在所述发酵培养基中的浓度为2 g/L；

所述微量元素溶液在所述发酵培养基中的浓度为10 ml/L；

所述七水硫酸镁在所述发酵培养基中的浓度为1.2 g/L；

所述氨芐青霉素在所述发酵培养基中的浓度为150 mg/L；

所述硫胺素盐酸在所述发酵培养基中的浓度为4.5 mg/L；

所述补料溶液由甘油、酵母提取物、微量元素溶液、七水硫酸镁和水组成；

所述甘油在所述补料溶液中的浓度为995.2 g/L；

所述七水硫酸镁在所述补料溶液中的浓度为40 g/L；

所述酵母提取物在所述补料溶液中的浓度为10 g/L；

所述微量元素溶液在所述补料溶液中的浓度为14.9 ml/L；

所述步骤（2）包括如下步骤：

1）将发酵后菌体稀释至20-35OD₆₀₀，用裂解液裂解发酵后菌体，将发酵后菌体内的质粒释放在裂解液中，得到裂解后菌体；

2）将所述裂解后菌体依次经过过滤澄清、浓缩和生理盐水透析后，再进行硫酸铵沉淀作用，得到沉淀后的质粒液；所述硫酸铵的浓度为3-3.8M；所述硫酸铵沉淀作用的时间为20-40 min；

3）将所述沉淀后的质粒液依次经过过滤和PBS透析，得到透析后的质粒液；

4）将所述透析后的质粒液依次经过浓缩和除菌过滤，得到疫苗成品。

2.权利要求1所述的方法在大规模生产动物核酸疫苗中的应用。

3.权利要求1所述的方法在提高核酸疫苗产量中的应用。