[发明专利]四病原体同步检测试剂盒及其应用和制备

说明书

本发明提供了同时检测样品中HBV、HCV、HIV以及TP等四种病原体的免疫检测试剂盒，其包括：用各病原体的抗原或抗体标记的磁微粒、与各病原体的抗原或抗体偶联的吖啶酯、阴性对照和各阳性对照。本发明还提供了该试剂盒的应用和制备方法等。

技术领域

本发明属于免疫检测技术领域，具体而言，本发明涉及乙型肝炎病毒 (HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、人免疫缺陷病毒(HIV)和梅毒螺旋体(TP)等四种病原体的检测试剂盒及其应用和制备方法等。

背景技术

乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、人免疫缺陷病毒(HIV)和梅毒螺旋体(TP)均为国家规定的重大传染性疾病，流行的范围广，严重影响人民的身体健康。其中，尤其是HIV，国际医学界至今尚无防治艾滋病的有效疫苗、药物和疗法，自1985年在中国境内首次发现艾滋病病例报告数以来，我国艾滋病病例报告数平均以每年30％-40％的速度增加。

除了传统的细胞学检查外，早期对这四种病原体的免疫学联合检测方法操作较为繁琐，过程不容易标准化，检测灵敏度低，尤其是特别容易出现假阴性结果。所以近年来，对这四种病原体的检测逐渐倾向于用基于核酸的PCR法来检测，例如，中国专利申请CN101487062A公开了一种同步检测肝炎、艾滋病毒和梅毒螺旋体核酸的试剂盒，其采用一步法单管单酶多项联合检测的TaqMan PCR扩增体系；又如，中国专利申请CN102230032A公开了一种病原体核酸的等温链置换多重检测卡，可以多重检测HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA和TP DNA，其采用等温链置换来进行多重检测。

然而，本发明人发现，由于PCR的灵敏度太高，而检测实验室难免不受各种检测样品的污染，即使进行消毒，也很难完全去除各病原体的病毒核酸片段，因此造成不少假阳性结果，容易引起纠纷。

近年来，对这四种病原体的免疫学联合检测方法也有所发展，但是主要使得过程标准化，然而检测灵敏度，尤其是结果准确性方面，改进不大。例如，中国专利申请CN102023216A公开了一种对乙肝、丙肝、梅毒、艾滋病原体进行共检的悬浮芯片，可快捷地同时检测待检样品中的乙肝、丙肝、梅毒、艾滋病原体，然而本发明人发现，其检测准确性还有待进一步提高，尤其是其容易造成 HIV检测假阴性结果，而这样的结果是比假阳性结果危害大得多的，因此至今未推广使用。而中国专利申请CN101373187A公开了一种通过单次实验即可实现艾滋、乙肝、丙肝、梅毒这四种重大传染病中的三到四项同时筛查的免疫层析试剂盒，其基于胶体金，所以这种试剂盒检测灵敏度不高，而且混合划线时也无法避免HIV检测的假阴性结果。

为此，本发明人凭借长期在本领域深耕的经验，在经历大量实验失败的基础上，发现要开发乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人免疫缺陷病毒和梅毒螺旋体同时适用的高灵敏度、高精确度、高可靠性并且检测方便迅速的免疫分析方法，需用多方面的协同改进，包括抗原或抗体的设计或选择，抗原或抗体载体的选择，显示(发光)标记物的制备，以及阴性对照和阳性对照等。本发明人最终开发出了同步检测乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人免疫缺陷病毒和梅毒螺旋体的检测试剂盒，其不但灵敏度高、可靠性好，不易受人为操作因素影响，尤其是能够避免HIV的假阴性检测结果的出现，而且操作方便迅速，操作便于标准化，可用于急诊检测等。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于提供一种HBV、HCV、HIV和TP同时适用的高灵敏度、高精确度、高可靠性并且检测方便迅速的同步检测试剂盒及其免疫分析HBV抗原、HCV抗体、HIV抗原和抗体以及TP抗体中的应用和其中试剂的制备方法等。

具体而言，在第一方面，本发明提供了同时检测样品中HBV抗原、HCV抗体、HIV抗原和抗体以及TP抗体的免疫检测试剂盒，其包括：

(1.1)第1.1容器，其中容纳用HBsAg抗体标记的磁微粒；

(1.2)第1.2容器，其中容纳用HCV抗原标记的磁微粒；