[发明专利]一种高效检测血液中15种胆汁酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及胆汁酸检测领域，具体而言，涉及一种高效检测血液中15种胆汁酸的方法。

背景技术

胆汁酸是胆汁中的主要有机成分，其中包含了多种结构近似的类固醇类化合物。胆汁酸在体内具有乳化脂肪、产生胆汁、防止胆结石产生等重要的生理功能。

目前研究发现，多种肝胆疾病都会引起胆汁酸的肝肠循环障碍，从而导致血清胆汁酸谱异常，而该异常状况亦会影响肝脏对胆汁酸的合成和分泌。因而，血清胆汁酸是衡量肝胆功能正常与否的重要标志物。

在传统的临床实践中，一般仅对总胆汁水平进行测定。然而，由于不同的胆汁酸的毒性与其生化特征有关，因此，检测身体中的每一种胆汁酸而非简单的对总胆汁酸进行定量，对于了解胆汁酸相关的生理和病理状态非常重要。但是，目前现有技术中所采用的常规方法，是难以对血液中不同胆汁酸的含量进行精确的分析和测定的。

同时，在传统的胆汁酸检测方法中，由于需要对血液样本进行长距离的运输，不仅保存不便且容易发生交叉污染并导致相应的生物安全问题。因此，开展安全、有效的胆汁酸检测十分必要。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种高效检测血液中15种胆汁酸的方法，本发明方法中，将血清直接保存在滤纸片上，并运用高效的萃取过程，将提取的胆汁酸于液质联用色谱直接进样，从而能够高效、高通量、高重复性的检测血液中的15种胆汁酸，具有广阔的应用价值。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种高效检测血液中15种胆汁酸的方法，所述方法包括如下步骤：(a)样品处理：取全血或血清滴加至滤纸上，干燥后，在所得干血片上打孔取样；将取样品以含有胆汁酸同位素内标的甲酸-甲醇或者甲酸-乙腈混合溶液进行萃取，并混匀；将所得萃取液离心后取上清液，将上清液浓缩干燥后，以甲醇溶液复溶，所得溶液涡旋后离心，取上清液，即为待分析试样；(b)液相分离：将待分析试样以液相色谱进行分离，并将15种胆汁酸分离；(c)质谱检测：将经液相色谱分离的15种胆汁酸以质谱进行检测，得到各胆汁酸的峰面积与胆汁酸同位素内标的峰面积的比值；然后，根据各胆汁酸的线性方程计算得出相应胆汁酸的含量。

优选的，本发明所述高效检测血液中15种胆汁酸的方法中，步骤(a)中全血或血清的用量为10～200μL；和/或，所述干燥为风干，优选的，是在室温条件下风干3h以上。

优选的，本发明所述高效检测血液中15种胆汁酸的方法中，步骤(a)中甲酸-甲醇混合溶液中甲酸的含量0.01～10％；和/或，甲酸-乙腈混合溶液中甲酸的含量为0.01～10％。

优选的，本发明所述高效检测血液中15种胆汁酸的方法中，步骤(a)中是通过超声、恒温振荡或者杂交炉进行混匀。

优选的，本发明所述高效检测血液中15种胆汁酸的方法中，步骤(a)中所述浓缩干燥为冻干或氮气吹干。

优选的，本发明所述高效检测血液中15种胆汁酸的方法中，步骤(a)中所述甲醇溶液为浓度10～80％的甲醇溶液；优选的，所述甲醇溶液的用量为50～300μL。

优选的，本发明所述高效检测血液中15种胆汁酸的方法中，步骤(b)中流动相A相为碳酸氢铵水溶液，流动相B相为乙腈或甲醇溶液；和/或，流动相的流速为0.1～2mL/min。

优选的，本发明所述高效检测血液中15种胆汁酸的方法中，步骤(b)中碳酸氢铵水溶液的浓度为0.5～10mmol/L。

优选的，本发明所述高效检测血液中15种胆汁酸的方法中，步骤(c)中质谱条件为：采用ESI离子源，正离子MRM扫描，喷雾口位置：3∶7，雾化气流速为5～10L/min，气帘气流速为5～10L/min，碰撞气流速为5～10L/min。

优选的，本发明所述高效检测血液中15种胆汁酸的方法中，步骤(c)中ESI离子源的电压为2500V，温度为400℃。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

(1)本发明方法解决了血液样本无法长距离运输、保存的问题，能有效避免过程中可能带来的生物安全问题；

(2)本发明方法适用于检测机体血液中的15种胆汁酸，仪器响应度高，对样品的检测专一性强、灵敏度高、稳定性强，各项方法学指标均可简便、可靠地满足实际检测的需要；

(3)本发明检测胆汁酸方法的应用范围广，且可靠性高。

附图说明