[发明专利]一种高效检测血液中15种胆汁酸的方法

权利要求书

1.一种高效检测血液中15种胆汁酸的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(a)样品处理：

取全血或血清滴加至滤纸上，干燥后，在所得干血片上打孔取样；

将取样品以含有胆汁酸同位素内标的甲酸-甲醇或者甲酸-乙腈混合溶液进行萃取，并混匀；

将所得萃取液离心后取上清液，将上清液浓缩干燥后，以甲醇溶液复溶，所得溶液涡旋后离心，取上清液，即为待分析试样；

(b)液相分离：

将待分析试样以液相色谱进行分离，并将15种胆汁酸分离；

(c)质谱检测：

将经液相色谱分离的15种胆汁酸以质谱进行检测，得到各胆汁酸的峰面积与胆汁酸同位素内标的峰面积的比值；

然后，根据各胆汁酸的线性方程计算得出相应胆汁酸的含量。

2.根据权利要求1所述的高效检测血液中15种胆汁酸的方法，其特征在于，步骤(a)中，全血或血清的用量为10～200μL；

和/或，所述干燥为风干，优选的，是在室温条件下风干3h以上。

3.根据权利要求1所述的高效检测血液中15种胆汁酸的方法，其特征在于，步骤(a)中，所述甲酸-甲醇混合溶液中甲酸的含量0.01～10％；

和/或，所述甲酸-乙腈混合溶液中甲酸的含量为0.01～10％。

4.根据权利要求1所述的高效检测血液中15种胆汁酸的方法，其特征在于，步骤(a)中，是通过超声、恒温振荡或者杂交炉进行混匀。

5.根据权利要求1所述的高效检测血液中15种胆汁酸的方法，其特征在于，步骤(a)中，所述浓缩干燥为冻干或氮气吹干。

6.根据权利要求1所述的高效检测血液中15种胆汁酸的方法，其特征在于，步骤(a)中，所述甲醇溶液为浓度10～80％的甲醇溶液；

优选的，所述甲醇溶液的用量为50～300μL。

7.根据权利要求1所述的高效检测血液中15种胆汁酸的方法，其特征在于，步骤(b)中，流动相A相为碳酸氢铵水溶液，流动相B相为乙腈或甲醇溶液；

和/或，流动相的流速为0.1～2mL/min。

8.根据权利要求7所述的高效检测血液中15种胆汁酸的方法，其特征在于，步骤(b)中，碳酸氢铵水溶液的浓度为0.5～10mmol/L。

9.根据权利要求1所述的高效检测血液中15种胆汁酸的方法，其特征在于，步骤(c)中，质谱条件为：采用ESI离子源，正离子MRM扫描，喷雾口位置：3∶7，雾化气流速为5～10L/min，气帘气流速为5～10L/min，碰撞气流速为5～10L/min。

10.根据权利要求9所述的高效检测血液中15种胆汁酸的方法，其特征在于，步骤(c)中，ESI离子源的电压为2500V，温度为400℃。