[发明专利]一种寨卡病毒NS1抗原突变体及其应用

说明书

本发明提供一种寨卡病毒NS1抗原突变体及其应用，通过对寨卡病毒NS1抗原及登革病毒四个型别NS1抗原氨基酸序列的比对分析，找出同源性极高的部分，进行基因水平的敲除突变，基因合成，载体构建，原核表达，抗原纯化及免疫学功能性分析，筛选到既不影响寨卡检测的灵敏度又能显著降低登革阳性样本的检出率，即降低了寨卡病毒与登革病毒抗体检测的交叉。

技术领域

本发明属于分子生物学及生物信息学技术领域，并涉及了基因工程及免疫学的内容，具体地，涉及寨卡病毒抗原及其应用。

背景技术

寨卡病毒属黄病毒科，黄病毒属，单股正链RNA病毒，直径20nm，是一种通过蚊虫进行传播的虫媒病毒，宿主不明确，主要在野生灵长类动物和栖息在树上的蚊子，如非洲伊蚊(Aedes aegypti)中循环。该病毒最早于1947年偶然通过黄热病监测网络在乌干达寨卡丛林的恒河猴中发现，随后于1952年在乌干达和坦桑尼亚人群中发现。该病毒活动一直比较隐匿，仅在赤道周围的非洲、美洲、亚洲和太平洋地区有寨卡病毒感染散发病例。最早一次暴发流行是2007年发生在西太平洋密克罗尼亚群岛的雅铺岛，更大的一次流行于2013年-2014年发生在大洋洲的法属波利尼西亚，感染了约32000人。伊蚊还传播黄病毒科中的其他种类病毒，其中就包括了登革热病毒，如何做到寨卡和登革两种疾病的区别检测，降低登革患者血清在寨卡诊断中的交叉对寨卡病毒抗体检测试剂的有效性具有重要意义。

寨卡病毒感染的典型症状包括急性起病的低热、斑丘疹、关节疼痛(主要累及手、足小关节)、结膜炎，其他症状包括肌痛、头痛、眼眶痛及无力。另外少见的症状包括腹痛、恶心、呕吐、黏膜溃疡和皮肤瘙痒。2013年和2015年分别在法属波利尼西亚和巴西塞卡疫情期间，有报道称寨卡病毒病可能会造成神经和自身免疫系统并发症。2015年巴西的寨卡暴发流行中发现了很多小头畸形(microcephaly)的新生儿。寨卡病毒经由母亲传染给孩子，寨卡发烧可能和新生婴儿的小头畸形有关连，其对成人的感染能影响神经系统，而且可能也与格林－巴利综合征(Guillain-Barre syndrome)存在联系。

寨卡病毒呈球形，直径约为40-70nm，有包膜。ZIKV核酸为一条长度为10,794碱基的单正链RNA，其编码基因顺序为5’-C-prM-E-NS1-NS2A-NS2B-NS3-NS4A-NS4B-NS5-3’。RNA翻译为一个多聚蛋白，然后通过蛋白酶裂解为结构蛋白衣壳蛋白(capsid，C)、前体膜蛋白(precursor membrane，prM)、膜蛋白(envelope，E)，以及7个非结构蛋白(nonstructuralprotein,NS)。其中NS1是一个具有多重功能的非结构蛋白。该蛋白结构在黄病毒科中高度保守。

寨卡病毒NS1蛋白由三个结构区组成：N端β-roll,C端β-ladder，和翼区(wingdomain)。NS1蛋白通常以二聚体和六聚体的形式存在。二聚体NS1在病毒基因组的复制过程中起着重要作用。六聚体NS1能帮助病毒逃避宿主免疫细胞的识别。

参考文献：

1.Xu X,Song H,Qi J,Liu Y,Wang H,Su C,Shi Y,Gao GF.Contribution ofinterwined loop to membrane association revealed by Zika virus full-lengthNS1 structure.EMBO J.2016 Oct 17；35(20):2170-2178.