[发明专利]一种代谢改造的枯草芽孢杆菌生物转化细胞及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种代谢改造的枯草芽孢杆菌生物转化细胞，其特征在于所述枯草芽孢杆菌生物转化细胞的制备方法为：

（1）获取链霉菌Streptomyces sp. X-119-6来源，经密码子优化后的L-谷氨酸氧化酶基因LGOX，编码所述L-谷氨酸氧化酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；所述L-谷氨酸氧化酶的基因序列如SEQ ID No.2所示；

（2）将步骤（1）所得L-谷氨酸氧化酶基因LGOX克隆至含有木糖的诱导型表达载体pHY-Bs.xyl上，构建含有L-谷氨酸氧化酶基因的重组质粒pHY-Bs.xyl-LGOX；

（3）将步骤（2）所得重组质粒pHY-Bs.xyl-LGOX转化至枯草芽孢杆菌WB600中，获得重组枯草芽孢杆菌WB600/pHY-Bs.xyl-LGOX，即重组枯草芽孢杆菌WB602。

2.一种代谢改造的枯草芽孢杆菌生物转化细胞，其特征在于所述枯草芽孢杆菌生物转化细胞的制备方法为：

（1）获取链霉菌Streptomyces sp. X-119-6来源，经密码子优化后的L-谷氨酸氧化酶基因LGOX，编码所述L-谷氨酸氧化酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；所述L-谷氨酸氧化酶的基因序列如SEQ ID No.2所示；

（2）将步骤（1）中所得L-谷氨酸氧化酶基因LGOX克隆至木糖诱导型表达载体pHY-Bs.xyl上，构建含有L-谷氨酸氧化酶基因的重组质粒pHY-Bs.xyl-LGOX；

（3）敲除枯草芽孢杆菌WB600中的谷氨酰胺合酶基因glnA，同时实现步骤（1）所述L-谷氨酸氧化酶基因的整合，构建了重组枯草芽孢杆菌WB603；

（4）将步骤（2）所得重组质粒pHY-Bs.xyl-LGOX转化至重组枯草芽孢杆菌WB603中，获得重组枯草芽孢杆菌WB603/pHY-Bs.xyl-LGOX，即代谢改造的重组枯草芽孢杆菌WB604。

3.一种代谢改造的枯草芽孢杆菌生物转化细胞，其特征在于枯草芽孢杆菌生物转化细胞的制备方法为：

（1）获取来自链霉菌Streptomyces sp. X-119-6来源，经密码子优化后的L-谷氨酸氧化酶基因LGOX，编码所述L-谷氨酸氧化酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；所述L-谷氨酸氧化酶的基因序列如SEQ ID No.2所示；

（2）将步骤（1）中所得L-谷氨酸氧化酶基因LGOX克隆至木糖诱导型表达载体pHY-Bs.xyl上，构建含有L-谷氨酸氧化酶基因的重组质粒pHY-Bs.xyl-LGOX；

（3）PCR扩增来源于Bacillus subtilis 168的谷氨酸转运蛋白GltP基因gltP；

（4）将步骤（3）扩增后的基因gltP克隆至步骤（2）所获得的重组质粒pHY-Bs.xyl-LGOX上，构建重组共表达质粒pHY-Bs.xyl-LGOX-GltP；

（5）将步骤（4）所得的重组共表达质粒pHY-Bs.xyl-LGOX-GltP转化至枯草芽孢杆菌WB600中，获得重组枯草芽孢杆菌WB600/pHY-Bs.xyl-LGOX-GltP，即重组枯草芽孢杆菌WB605。

4.一种权利要求1~3任一项所述代谢改造的枯草芽孢杆菌生物转化细胞的应用，其特征在于所述枯草芽孢杆菌生物转化细胞用于全细胞转化L-谷氨酸生产α-酮戊二酸，提高α-酮戊二酸的转化效率。