[发明专利]一种基于Crispr/cas9的捕获基因组目标序列的方法及其在高通量测序中的应用

权利要求书

1.一种基于Crispr/cas9系统从基因组DNA中捕获目标基因序列的方法，包括如下步骤：

1)、根据目标基因序列设计合成多个gRNA；

每个所述gRNA能结合且识别所述目标基因序列不同靶区域；

所述目标基因序列能通过所述gRNA引导cas9酶将其切割为多个100-300bp的片段化产物；

2)用所述多个gRNA和所述cas9酶对所述基因组DNA进行切割反应，得到含有多个100-300bp的片段化产物的切割产物；

3)捕获所述切割产物中的目标基因序列的多个100-300bp的片段化产物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

步骤1)中，所述设计合成多个gRNA的方法为如下a或b：

a所示的方法包括如下步骤：

(1)根据所述目标基因序列设计多个所述gRNA，再根据所述gRNA设计合成用于制备其对应转录模板的引物对，得到多个所述gRNA转录模板对应的引物对；

(2)将多个所述gRNA转录模板对应的引物对分别进行聚合酶链式反应，得到对应的多个所述gRNA转录模板，

(3)转录所述对应的多个gRNA转录模板，得到多个gRNA；

b所示的方法包括如下步骤：

(1)根据所述目标基因序列设计多个所述gRNA，再根据所述gRNA设计合成对应的转录模板，得到多个gRNA转录模板；

(2)转录所述多个gRNA转录模板，得到多个gRNA。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

所述转录多个gRNA转录模板为分别转录或者混合多个gRNA转录模板再共同转录；

或所述捕获的方法为磁珠法。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：

所述基因组DNA为人或动物或其他物种的细胞的基因组DNA；

所述目标基因序列为BRCA1基因的外显子和BRCA2基因的外显子；

所述BRCA1基因的外显子对应的多个gRNA的核苷酸序列分别为序列158-220；

所述BRCA2基因的外显子对应的多个gRNA的核苷酸序列分别为序列221-313；

或所述BRCA1基因的外显子对应的多个gRNA对应的引物对中的上游引物的核苷酸序列分别为序列1-序列63，下游引物的核苷酸序列为序列157；

或所述BRCA2基因的外显子对应的多个gRNA对应的引物对中的上游引物的核苷酸序列分别为序列64-序列156，下游引物的核苷酸序列为序列157。

5.权利要求1-4中任一所述的方法在目标基因序列的高通量测序文库制备中的应用。

6.权利要求1-4中任一所述的方法在目标基因序列的高通量测序中的应用。

7.一种目标基因序列的高通量测序方法，包括如下步骤：

1)权利要求1-4中任一所述的方法捕获所述目标基因序列的多个100-300bp的片段化产物；

2)用所述多个100-300bp的片段化产物制备高通量测序文库；

3)高通量测序所述高通量测序文库，实现目标基因序列的高通量测序。

8.Crispr/cas9系统在基因组DNA中捕获或分离或聚集目标基因序列中的应用；

所述Crispr/cas9系统包括多个gRNA和cas9酶；

所述多个gRNA引导所述CAS9酶将所述目标基因序列切割为多个大小为100-300bp片段化产物。

9.一种用于基因组DNA中捕获目标基因序列的试剂盒，包括权利要求8所述应用中的所述Crispr/cas9系统。

10.一种高通量测序目标基因序列的试剂盒，包括权利要求8所述应用中的所述Crispr/cas9系统和测序文库制备所需试剂。