[发明专利]一种从黑豆皮中提取表儿茶素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物有效成分提取，具体属于一种从黑豆皮中制备高纯度表儿茶素的方法。

背景技术

表儿茶素(-epicatechin)是原花青素(proanthocyanidin)的一种，为3-羟基黄烷醇衍生物，具有C6-C3-C6结构的多元酚类物质，其基本结构是α-苯基苯并吡喃，即在两个苯环之间以一个三碳链相连，其中一个碳原子与A环上的氧原子连接成吡喃环。现已证实，儿茶素类物质具有多种对健康有益的功效，包括清除自由基、抗氧化、抗癌、抗炎、抗菌、防紫外线、预防心血管疾病等。因此，儿茶素类被视为开发功能食品和植物性医药的理想天然产物。[Peng,Han,etal.Journal of Functional Foods(2017),32,296-312.]

黑豆亦称马豆、冬豆子、稆豆，大多数黑豆籽粒较小，俗称小黑豆。黑豆的籽粒多扁椭圆、扁圆、肾状、长椭圆形，圆粒较少。我国的黑豆种质资源异常丰富，据统计，全国共搜集保存大豆22000多份，其中黑豆栽培品种就有2800余种，占全部大豆种质资源的13.2％，广泛分布在个27个省、市，尤以山西、河北、陕西栽培较多，其中以北京春大豆、黄淮夏大豆最为常见。目前为止，黑豆皮的具体化学成分报道，主要集中在花青素方面，而对于原花青素的研究较少。[Jin Hwan Lee,etal.Food Chemistry.2009,112(1),226-231.]。对于以黑豆皮为原料制备表儿茶素的方法没有报道。

发明内容

本发明的目的是为了提供一种从黑豆皮中快速、高效提取表儿茶素的方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种从黑豆皮中提取表儿茶素的方法，包括以下步骤：

取黑豆皮，粉碎，过40-60目筛；按1g/10-50mL比例放入50-70％丙酮水溶液中，调节pH2.0，浸提3-5h，将提取液用滤纸过滤，得滤液；将滤液减压浓缩，得粗提物；粗提物湿法上柱，上样量40-60mg粗提物/g树脂；首先用双蒸水洗脱至无浑浊液流出，流速≦4mL/min且pH值稳定在6-8，再用洗脱剂60％乙醇水溶液洗脱至流出液无色且pH在5-7，洗脱液旋转蒸发，冷冻干燥得粗提样；粗提样湿法上Sephadex LH-20柱，依次用25％、50％、60％、70％、80％、90％甲醇水溶液进行洗脱，用量均为三倍柱体积，流速均为50d/min；收集25％甲醇水溶液洗脱液作为洗脱液Ⅰ，收集50％甲醇水溶液后半部分洗脱液(在280nm处有吸收而在360nm处无吸收的洗脱液部分)作为洗脱液Ⅱ；合并洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ进行浓缩，回收甲醇，得黑豆皮表儿茶素。

所述黑豆皮和丙酮水溶液的比例优选为1g/10-40mL。

所述的pH调节剂优选为醋酸。

所述的提取时间优选为3h。

本发明从黑豆皮中提取表儿茶素的方法，具有如下优点：

1.本发明以黑豆皮为原料分离制备原儿茶素，不仅可以增加黑豆产业的附加值，带来经济效益，还可以使资源得到充分利用。

2.本发明采用Sephadex LH-20为柱填料分离制备表儿茶素，效率高，并能保持其原有结构和活性，所得到的表儿茶素纯度高，溶剂可重复利用，避免污染和浪费。

具体实施方式

实施例1从黑豆皮中提取表儿茶素：

将10g山西省乌皮青仁黑豆皮，粉碎，过60目筛。按1g/10mL比例放入70％丙酮中，用醋酸调节pH 2.0,浸提3h，将提取液用滤纸过滤，将滤渣重复上述操作，浸提2次(即以滤渣代表黑豆皮进行如上操作)，合并3次所得滤液，将滤液减压浓缩，得粗提物。上样量50mg粗提物/g树脂，柱型2.5cm×50cm，湿法上柱。首先用双蒸水洗脱直至无浑浊液流出，流速≦4mL/min且pH值稳定在7左右，再用洗脱剂60％乙醇洗脱至流出液无色pH在6左右，洗脱液旋转蒸发，冷冻干燥得粗提样。选用体积为1.5cm×30cm的Sephadex LH-20柱体，湿法上柱，依次用25％,50％,60％,70％,80％,90％甲醇溶液进行洗脱，用量均分别为三倍柱体积(即分别为180ml)；流速均为50d/min，收集25％甲醇全部洗脱液为洗脱液Ⅰ，收集50％甲醇水溶液后半部分洗脱液(在280nm处有吸收而在360nm处无吸收的洗脱液部分)作为洗脱液Ⅱ。合并洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ进行浓缩，回收甲醇，得黑豆皮表儿茶素0.39g。上述黑豆皮表儿茶素经高效液相色谱法检测，纯度为＞95％。

实施例2从黑豆皮中提取表儿茶素：