[发明专利]一种高活性固定化退浆酶的制备方法

权利要求书

1.一种高活性固定化退浆酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)用双氧水对海藻酸钠进行处理，并将处理后的海藻酸钠和去离子水混合搅拌至固体溶解，制得改性海藻酸钠水溶液；

(2)明胶和去离子水混合制得明胶溶液，并向明胶溶液中加入四水硝酸钙，搅拌至固体溶解，得到混合溶液；

(3)将步骤(1)制得的改性海藻酸钠水溶液缓慢加入到步骤(2)制得的混合溶液中，边加入边搅拌，加入完毕后，继续搅拌2-6h，得到复合水凝胶；

(4)将无水乙醇和冰醋酸混合搅拌均匀，缓慢加入四氯化钛，搅拌制得的混合液转移至反应釜中，滴加三乙胺，150℃下反应10-15h，反应结束后，冷却至室温制得纳米氧化钛溶胶；

(5)配制质量浓度为5-10％的退浆酶溶液，并将其加入到纳米氧化钛溶胶中，调节其pH至中性，然后滴加上述制得的复合水凝胶，滴加完毕后，30℃下搅拌5h，放入三辊研磨机中研磨，过滤，固体用去离子水洗涤，干燥，研磨，得到固定化退浆酶。

2.如权利要求1所述的一种高活性固定化退浆酶的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，双氧水和海藻酸钠的质量比为(0.005-0.01):1。

3.如权利要求1所述的一种高活性固定化退浆酶的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述改性海藻酸钠水溶液的质量浓度为1-5％。

4.如权利要求1所述的一种高活性固定化退浆酶的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述明胶溶液的质量浓度为4％。

5.如权利要求1所述的一种高活性固定化退浆酶的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述四水硝酸钙与明胶的质量比为1：(1.5-4)。

6.如权利要求1所述的一种高活性固定化退浆酶的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述改性海藻酸钠水溶液、混合溶液的质量比为(1-4)：(6-8)。

7.如权利要求1所述的一种高活性固定化退浆酶的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，改性海藻酸钠水溶液的滴加速度为2-6mL/min。

8.如权利要求1所述的一种高活性固定化退浆酶的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述四氯化钛的滴加速度为1.5-3.5mL/min。

9.如权利要求1所述的一种高活性固定化退浆酶的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述无水乙醇、冰醋酸、四氯化钛、三乙胺的体积比为30:30：(0.7-1.5)：1。

10.如权利要求1所述的一种高活性固定化退浆酶的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，所述退浆酶溶液、纳米氧化钛溶胶、复合水凝胶的质量比为1:3:(1-3)。