[发明专利]一种南瓜游离小孢子诱导培养基及诱导培养方法

权利要求书

1.一种南瓜游离小孢子诱导培养基，其特征在于：所述南瓜游离小孢子诱导培养基的配方如下：KNO₃ 80-90mg/L，MgSO₄∙7H₂O 140-160mg/L，KH₂PO₄ 70-76mg/L，Ca(NO₃)₂∙4H₂O160200mg/L，MnSO₄∙4H₂O 25-30mg/L，Na₂-EDTA 11-14mg/L，FeSO₄∙7H₂O 12-15mg/L，H₃BO₃8.0-8.5mg/L，ZnSO₄∙7H₂O 8.5-9.5mg/L，KI 0.45-0.55mg/L，AgNO₃ 15-19mg/L，Na₂MoO₄∙2H₂O 0.2-0.3mg/L，CuSO₄∙5H₂O 0.02-0.03mg/L，CoCl₂∙6H₂O 0.02-0.03mg/L，腺嘌呤13-17mg/L，L-谷氨酰胺450-550mg/L，维生素B1 0.9-1.1mg/L，维生素B6 0.6-0.8mg/L，Vc0.55-0.65mg/L，烟酸4.5-5.5mg/L，肌醇160-180mg/L，甘氨酸3.5-4.5mg/L，环鸟苷酸0.15-0.25g/L，谷胱甘肽30-35mg/L，甲基亚硝基脲1.2-1.8g/L，蔗糖55-65g/L，植物凝胶 3.0-3.5g/L，6-BA 0.15-0.25mg/L，NAA 0.3-0.4mg/L，甘露醇10-14g/L，聚乙二醇140-180mg/L，水解蛋白1.0-1.4g/L，植物硫化激动素PSK-α25-35pmol/L，pH5.4-5.8； 所述南瓜的品种是锦红一号和黄金二号。

2.一种采用权利要求1所述南瓜游离小孢子诱导培养基的南瓜游离小孢子诱导培养方法，其特征在于：将南瓜种子在春季3-4月份播于大田，待南瓜秧长至3-4米后进入初花期，选择单核晚期南瓜花蕾进行取材，置于4℃冰箱内低温预处理1-2d，接种前，将花蕾转移入超净工作台无菌烧杯中，倒入70%酒精进行表面消毒，浸泡1min后倒掉酒精，再加入0.1%氯化汞溶液浸泡消毒10min，然后用无菌水冲洗3次；沥干水分后，在B5培养基中用平头玻棒碾压花蕾，挤出小孢子；悬浮液经50μm无菌微孔纱布过滤，收集滤液于10ml离心管，850rpm下离心3min，沉淀物加5mL B5培养基，摇匀，850rpm下离心2min，重复两次，所得沉淀物即为南瓜游离小孢子；将南瓜游离小孢子转移入权利要求1所述的南瓜游离小孢子诱导培养基中，33℃热激处理 48h后转入25℃暗培养直至胚性愈伤组织形成。

3.根据权利要求2所述的南瓜游离小孢子诱导培养方法，其特征在于：所述的单核晚期南瓜花蕾的选材标准为：测量花蕾的纵茎和横茎长度并计算纵横比，取材纵横茎之比为2.4-2.6的南瓜花蕾。