[发明专利]一种来那度胺对映异构体超临界流体色谱分离方法

说明书

本发明涉及一种来那度胺对映异构体超临界流体色谱分离方法，所述色谱分离方法包括如下步骤：将来那度胺样品溶于低级醇中，采用超临界流体色谱法在手性固定相上进行手性分析分离；所述流动相为超临界二氧化碳和低级醇的混合物，所述低级醇为甲醇或乙醇；所述流动相中超临界二氧化碳和低级醇的体积比为60~75:40~25；所述手性固定相为硅胶表面涂覆或键合三（3，5‑二甲基苯氨基甲酰化）直链淀粉手性固定相、硅胶表面键合4‑氯苯氨基甲酰化‑β‑环糊精手性固定相或硅胶表面键合3，5‑二甲基苯氨基甲酰化‑β‑环糊精手性固定相中的一种。本发明提供的超临界流体色谱分离方法很好地实现来那度胺对映异构体的手性色谱分离。在优选条件下，来那度胺对映异构体的分离度为5.05。

技术领域

本发明属于手性色谱分离技术领域，更具体地，涉及一种来那度胺对映异构体超临界流体色谱分离方法。

背景技术

超临界流体色谱(SFC)是采用超临界流体为流动相，以固体吸附剂或键合到载体上的高聚物为固定相的一种分离技术[Journal of Chromatography A，2016，1467:33-55]。与HPLC相比，SFC分析分离具有速度较快、分析时间短，分离效率高等的显著优势；同时，样品在超临界流体中的溶解度显著增大，有机溶剂消耗大幅降低，超临界流体色谱制备技术被视为一种绿色制备工艺，在拆分手性药物领域引起研究者的极大关注[Journal ofSeparation Science，2014，37:1411-1418；Analytical Chemistry，2006，78:3835-3838]。

来那度胺(Lenalidomide，商品名Revlimid，见式1)，化学名：3-(4-氨基-1,3-二氢-1-氧代-2H-异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮，由美国Celgene公司研制生产， 2005年12月在美国获FDA批准上市。研究表明，来那度胺具有比沙利度胺更强的抑制血管生成和免疫调节作用，药效高于100倍，同时神经毒性和不良反应大幅减小，特别是不会引起婴儿出生缺陷，是抗血管增生和抗肿瘤性质的新型免疫调节剂，近年来成为医药领域的超级重磅炸弹式药物。

式（I）

目前，市场销售的来那度胺药品为外消旋混合物[中国新药杂志，2011，20: 75-78]。研究者主要采用高效液相色谱法（HPLC）对来那度胺原料药和制剂进行纯度分析、杂质检测以及开展药动力学研究 [Journal of Liquid Chromatographic RelatedTechnology，2010，33：654-679；现代生物医学进展，2014，14(20): 3810- 3814；Therapeutic Drug Monitoring，2008，30(5)：620-627；中国发明专利申请201410225648.X；中国发明专利申请201210225648.X；国际发明专利WO2011/064574]；另报道采用核磁共振波谱法以马来酸为内标测定来那度胺含量的方法[中南药学，2017，15(2)，214-217]。

然而，对来那度胺进行手性分析分离的研究相对较少。Chen NH等在AstecChirobiotic V色谱柱上采用HPLC 串联质谱法以¹³C₅-CC-5013戊二酰亚胺为内标分别对人的血浆、尿液和精液等样品中S-来那度胺和R-来那度胺进行定量测定[The Journal ofClinical Pharmacology，2007，47(12): 1466-1475；The Journal of ClinicalPharmacology，2010，50(7):767-774]；N.Z. Alzoman在填充涂覆(3-氯-4-甲基苯氨基甲酰化)纤维素手性固定相的手性柱上，以甲醇-醋酸-三乙胺为流动相、奥硝唑为内标的条件下对来那度胺进行手性定量分析，研究了来那度胺对映异构体在光照、加热、酸、碱和氧化剂等条件下稳定性[Journal of Chromatographic Science，2016，54(5):730-735]。