[发明专利]一种NTx检测试纸、试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于免疫化学检测技术领域，具体涉及一种NTx检测试纸、试剂盒及其制备方法。

背景技术

骨质疏松症(osteoporosis,OP)是以骨量减少，骨组织微细结构破坏导致骨脆性增加和骨折危险性增加为特征的一种系统性、全身性骨骼疾病。随着人口寿命的不断增长及老年人口不断增加，骨质疏松症的发病率已在世界常见多发病中跃居继心脑血管病、癌症之后的第七位，是继心血管疾病后第二大医疗问题。我国是骨质疏松症患者最多的国家，发病人数约l亿人，骨质疏松症成为影响老年人健康的一个主要问题，50岁以上的人群中大约有一半的女性和四分之一的男性患有骨质疏松症。当前对于骨质疏松症研究的重点是如何早期作出诊断，最终通过有效的干预，防止症状的出现和骨折的发生。

人体的骨组织在不断进行着新陈代谢，骨形成、骨吸收和静止3个阶段构成了骨转换的过程，在骨转换过程中产生的一些代谢物，叫做骨转换生化标志物(biochemical markers of bone turnover)，简称骨标志物(bone markers)。骨转换生化标志物反映了骨转换的总体速率，代表了全身骨骼的动态状况，许多非骨骼性疾病也会影响骨代谢而改变骨转换的速率，这些标志物已经成为诊断代谢性骨病、评估抗骨吸收和促骨形成药物疗效的重要指标。由于骨转换标志物检测具有无创、快速、灵敏的优点，对于其应用于骨质疏松症的早期发现、骨折危险性预测、骨转换类型判断、骨丢失速率判断，以及了解病情进展、选择干预措施和疗效监测等方面都有着重要的价值。

骨标志物分为骨形成标志物和骨吸收标志物，骨形成标志物代表成骨细胞活动和骨形成时的骨代谢产物，骨吸收标志物代表破骨细胞活动和骨吸收时的代谢产物，特别是骨基质降解产物。其中骨形成的标志物有：血清碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OC)、骨源性碱性磷酸酶(BALP)、I型原胶原C-端前肽(PICP)、I型原胶原N-端前肽(CINP)；骨吸收的标志物有：空腹2小时尿钙/肌酐比值、血清抗酒石酸酸性磷酸酶(TPACP)、Ⅰ型胶原C末端肽(S-CTX)、尿吡啶啉(Pyr)、尿脱氧吡啶啉(D-Pyr)、尿Ⅰ型胶原交联C-末端肽(U-CTX)、尿Ⅰ型胶原交联氨基末端肽(U-NTx)。

胶原又称胶原蛋白，是一种糖蛋白，在人体中主要分布于结缔组织。胶原共有4型，骨有机质中的胶原90％为I型胶原。胶原蛋白的基本单位称为原胶原蛋白，原胶原蛋白由三条相互缠绕的α-肽链构成，两端的非螺旋部分，称为末端肽，分别由16个氨基和26个羧基构成，称为氨基末端肽(NTx)和羧基末端肽(CTx)。大量临床试验和研究证明NTx与骨转移的累积范围及活动程度之间存在较强的相关性，其中尿液中I型胶原交联氨基末端肽(amino-terminal telopeptide of type I collagen，U-NTx)是骨吸收的一个敏感的和特异的指标，在预测骨量丢失趋势及疗效监测方面具有重要的价值。

临床上一般使用电化学免疫法和ELISA法检测骨代谢标志物，这两种方法的检测时间过长，电化学免疫法的检测时间一般在45分钟以上，ELISA法的检测时间一般在1小时30分钟以上。并且，以上两种方法的操作较为复杂，需要特殊的设备，以及专业的检验人员操作才能完成。

中国专利文献CN106370844A公开了一种人骨代谢标志物检测双胶体金试纸条及应用其的检测装置，其中试纸条包括样品垫、第一结合垫、第二结合垫和硝酸纤维素膜，第一结合垫涂覆有金标链霉亲和素，第二结合垫涂覆有金标生物素化抗体，金标链霉亲和素与金标生物素化抗体可以特异性地结合。在样品检测时，样本中的骨代谢标志物结合金标生物素化抗体，通过金标链霉亲和素与金标生物素化抗体放大胶体金产生的信号，实现了对血清骨钙素(OC)的高灵敏度检测。利用上述试纸条能够提高骨代谢标志物检测的效率与灵敏度，但其检测结果必须依靠金标定量阅读仪读取，需要专业人员使用，增加了骨代谢标志物的检测成本和检测步骤，不利于检测试纸的大规模普及应用。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中的骨代谢标志物检测的胶体金试纸条必须依赖检测仪器确定检测结果，导致检测成本高、检测过程复杂；从而提供一种检测成本低、操作简单、不需要依赖设备，能够通过肉眼观测完成对NTX1半定量检测的试纸条。