[发明专利]PDE‑5抑制剂胶体金免疫层析试纸条及其制备和使用方法

权利要求书

1.一种PDE-5抑制剂胶体金免疫层析试纸条，该试纸条包括PVC底板、样品垫、金标垫、检测线、控制线、硝基纤维素膜、吸水垫，其特征在于：所述样品垫、金标垫、检测线、控制线、硝基纤维素膜、吸水垫均设置在PVC底板的上方，所述样品垫设置在PVC底板的一端的边缘，金标垫设置在样品垫内侧并与样品垫部分重叠；金标垫上包被有胶体金标记的那非类通用抗体和拉非类通用抗体混合物；所述吸水垫设置在PVC底板的另一端，硝基纤维素膜设置在金标垫与吸水垫之间并分别与两者部分重叠；所述检测线设置在硝基纤维素膜上靠近金标垫的一端，所述控制线喷涂在靠近吸水垫的一端。

2.根据权利要求1所述的PDE-5抑制剂胶体金免疫层析试纸条，其特征在于：所述样品垫和金标垫为玻璃纤维膜。

3.根据权利要求1所述的PDE-5抑制剂胶体金免疫层析试纸条，其特征在于：所述检测线包被那非类通用半抗原与载体蛋白的偶联物，以及拉非类通用半抗原与载体蛋白的偶联物。

4.根据权利要求1所述的PDE-5抑制剂胶体金免疫层析试纸条，其特征在于：所述控制线上包被兔抗鼠或羊抗鼠IgG抗体。

5.根据权利要求1所述的PDE-5抑制剂胶体金免疫层析试纸条，其特征在于：所述那非类通用半抗原(NFA)如式Ⅰ所示，所述拉非类通用半抗原(LFA)如式Ⅱ所示：

6.如权利要求1-5任意一项所述的PDE-5抑制剂胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1).制备通用半抗原-载体蛋白偶联物：将那非类通用半抗原(NFA)或拉非类通用半抗原与牛血清白蛋白或卵清白蛋白，通过碳二亚胺法、活化酯法、混合酸酐法、重氮化法或戊二醛法等方法进行偶联，制备通用半抗原-BSA偶联物与通用半抗原-OVA偶联物；

(2).制备那非类通用抗体和拉非类通用抗体：将通用半抗原-BSA偶联物多次免疫小鼠，取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞在体外进行融合，制备杂交瘤细胞，将阳性杂交瘤细胞注入小鼠腹腔收集腹水，或以体外细胞培养的收集上清液的方式制备那非类通用抗体和拉非类通用抗体；

(3).制备胶体金：以柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液，胶体金溶液中胶体金颗粒直径在20～40nm之间；

(4).胶体金标记抗体：在胶体金溶液中加入那非类通用抗体和拉非类通用抗体，加入上述两种抗体的量为每毫升胶体金溶液中加入1μg～20μg，加入后混匀，通过离心纯化、浓缩，制备成胶体金标记的那非类通用抗体和拉非类通用抗体混合物；

(5).将胶体金标记的那非类通用抗体和拉非类通用抗体混合物喷涂并固定在金标垫上，将NFA-OVA偶联物和LFA-OVA偶联物包被在检测线上(称作包被抗原)，将兔抗鼠或羊抗鼠IgG抗体包被在控制线上，并充分干燥；

(6).将硝基纤维素膜、金标垫、样品垫、吸水垫依次粘合在PVC底板上，切成条状，即制成检测那非类和拉非类成分的胶体金免疫层析试纸条。

7.根据权利要求6所述的PDE-5抑制剂胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于：步骤(4)中，那非类通用抗体与拉非类通用抗体的比例为1:1。

8.如权利要求1-5任意一项所述的PDE-5抑制剂胶体金免疫层析试纸条的使用方法，其特征在于：取少量样品用提取溶剂提取，得到样品溶液，将适量样品溶液滴加到样品垫上，样品溶液将会向吸水垫端移动；待过5-15分钟后，根据检测线和控制线的显色情况，判断样品中是否含有那非类或拉非类成分，判断方法如下：

1)检测线显红色，控制线显红色——阴性结果，样品中不含那非类和拉非类成分；

2)检测线不显红色，控制线显红色——阳性结果，样品中含有那非类或拉非类成分；

3)无论检测线显不显红色，控制线不显红色——试纸条失效。

9.根据权利要求8所述的PDE-5抑制剂胶体金免疫层析试纸条的使用方法，其特征在于：所述提取溶剂为乙醇水溶液或磷酸盐缓冲液中的一种或两者的混合物。

10.根据权利要求9所述的PDE-5抑制剂胶体金免疫层析试纸条的使用方法，其特征在于：所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.001-0.1mol/L，乙醇浓度为0.5％-20％。