[发明专利]一种牡丹籽油对小鼠免疫功能影响的实验方法

说明书

技术领域

本发明涉及牡丹籽油对小鼠免疫功能影响的实验技术领域，具体为一种牡丹籽油对小鼠免疫功能影响的实验方法。

背景技术

牡丹籽油，又称牡丹油，是由牡丹籽提取的木本坚果植物油，是中国特有的，因其营养丰富而独特，又有医疗保健作用，被有关专家称为“世界上最好的油，”是植物油中的珍品，也是中国独有的健康保健食用油脂。

牡丹籽是牡丹植株的精华结晶，传承了牡丹本身具有的一切特性外，它更有自己独特的医药和营养成分，牡丹种子是受果壳和种壳双层保护的坚果，具有天然的“长寿”基因。牡丹籽油是迄今为止所发现的油脂中最适合人体营养的油脂，是所有食用油总营养价值最高，成份结构最合理的。含有丰富的多不饱和脂肪酸，其营养价值远远超过被称为“人类健康之油”橄榄油，亚麻酸含量是橄榄油的二百多倍。多项指标也都高于其他油种。又不易氧化沉积在人体血管壁、心脏冠状动脉等部位。正是这些成分使其在医学和营养上发挥了重要作用而成为理想的食用油。不夸张地说，牡丹籽油的营养和保健作用是其它食用油无法比拟的。

目前，有关牡丹籽油的研究多集中在提取工艺、成分分析以及抗氧化活性研究等方面，有关牡丹籽油对免疫功能调节作用的深入研究较少。本发明从小鼠血清一氧化氮及一氧化氮合成酶水平、细胞因子水平、肠道sIgA含量的变化的角度，研究牡丹油对小鼠免疫功能的调节作用与作用途径，阐明应用牡丹油对改善小鼠健康水平的作用。

发明内容

（一）解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种牡丹籽油对小鼠免疫功能影响的实验方法，解决了有关牡丹籽油的研究多集中在提取工艺、成分分析以及抗氧化活性研究等方面，有关牡丹籽油对免疫功能调节作用的深入研究较少的问题。

（二）技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种牡丹籽油对小鼠免疫功能影响的实验方法，包括以下步骤：

S1、选择试验小鼠：小鼠选择二十一日龄ICR清洁级雄性小鼠，体重约

十三克，试验鼠用颗粒饲料；

S2、准备试验材料：准备试验所需要的牡丹籽油、牡丹籽油阳性制品、白介素－6（IL-6）、白介素-2（IL-2）肿瘤坏死因子－α（TNF-α）放射免疫试剂盒、分泌型免疫球蛋白（sIgA）放射免疫试剂盒和一氧化氮（NO）、一氧化氮合成酶（NOS）测定试剂盒；

S3、动物实验及样品制备：小鼠50只，随机分为5个处理组，即对照组（I组）、低剂量组（II组）、中剂量组（III组）、高剂量组（IV组）和阳性对照组（V组），每组10只，基础日粮预饲3天后进行试验，对照组每天灌胃生理盐水，II组、III组、IV组分别每天灌胃牡丹籽油0.25mL、0.5mL、1mL，V组每天灌胃牡丹籽油复合物0.5mL，连续灌胃20天，于第21天，用摘除眼球取血法取血，3000rpm离心15min，取血清，-20℃保存备用；处死各组小鼠，取脾脏并称重，然后用生理盐水1:10稀释并匀浆，5000rpm离心15min后取上清液，-20℃保存备用；取整段小肠，清洗肠内容物后，刮取肠黏膜，用生理盐水1:10稀释后匀浆，6000rpm离心30min后取上清液，-20℃保存备用；

S4、数据测定：分别对小肠黏膜sIgA水平、脾脏中IL-2，IL-6、TNF-α水平、血清中NO含量和血清中一氧化氮合成酶（NOS）活性进行测定；

S5、数据处理：对完成数据测定的数据均采用统计学进行处理；

S6、结果分析：对小鼠的脾脏重与相对脾重比较、小鼠血清NO、一氧化氮合成酶水平、小鼠脾脏IL-2、IL-6、TNF-α水平和小鼠肠黏膜中sIgA的含量进行数据分析。

优选的，在S2中，牡丹籽油、牡丹籽油阳性制品均由江苏农牧科技职业学院园林科技系制备；白介素－6（IL-6）、白介素-2（IL-2）肿瘤坏死因子－α（TNF-α）放射免疫试剂盒，购于北京北方生物技术研究所；分泌型免疫球蛋白（sIgA）放射免疫试剂盒，购于中国原子能科学研究所。一氧化氮（NO）、一氧化氮合成酶（NOS）测定试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所。

优选的，在S4中，用RIA法测定小肠黏膜sIgA水平，脾脏中IL-2，IL-6、TNF-α水平，血清中NO含量采用硝酸还原酶法测定，血清中一氧化氮合成酶（NOS）活性采用比色法测定。

优选的，在S5中，数据均以平均数±标准差（Mean±SD）表示，统计学处理用SPSS16.0进行One-WayANOVA检验，P<0.05表示差异显著，P<0.01表示差异极显著。