[发明专利]一种牡丹籽油对小鼠免疫功能影响的实验方法

权利要求书

1.一种牡丹籽油对小鼠免疫功能影响的实验方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1、选择试验小鼠：小鼠选择二十一日龄ICR清洁级雄性小鼠，体重约

十三克，试验鼠用颗粒饲料；

S2、准备试验材料：准备试验所需要的牡丹籽油、牡丹籽油阳性制品、白介素－6（IL-6）、白介素-2（IL-2）肿瘤坏死因子－α（TNF-α）放射免疫试剂盒、分泌型免疫球蛋白（sIgA）放射免疫试剂盒和一氧化氮（NO）、一氧化氮合成酶（NOS）测定试剂盒；

S3、动物实验及样品制备：小鼠50只，随机分为5个处理组，即对照组（I组）、低剂量组（II组）、中剂量组（III组）、高剂量组（IV组）和阳性对照组（V组），每组10只，基础日粮预饲3天后进行试验，对照组每天灌胃生理盐水，II组、III组、IV组分别每天灌胃牡丹籽油0.25mL、0.5mL、1mL，V组每天灌胃牡丹籽油复合物0.5mL，连续灌胃20天，于第21天，用摘除眼球取血法取血，3000rpm离心15min，取血清，-20℃保存备用；处死各组小鼠，取脾脏并称重，然后用生理盐水1:10稀释并匀浆，5000rpm离心15min后取上清液，-20℃保存备用；取整段小肠，清洗肠内容物后，刮取肠黏膜，用生理盐水1:10稀释后匀浆，6000rpm离心30min后取上清液，-20℃保存备用；

S4、数据测定：分别对小肠黏膜sIgA水平、脾脏中IL-2，IL-6、TNF-α水平、血清中NO含量和血清中一氧化氮合成酶（NOS）活性进行测定；

S5、数据处理：对完成数据测定的数据均采用统计学进行处理；

S6、结果分析：对小鼠的脾脏重与相对脾重比较、小鼠血清NO、一氧化氮合成酶水平、小鼠脾脏IL-2、IL-6、TNF-α水平和小鼠肠黏膜中sIgA的含量进行数据分析。

2.根据权利要求1所述的一种牡丹籽油对小鼠免疫功能影响的实验方法，其特征在于：在S2中，牡丹籽油、牡丹籽油阳性制品均由江苏农牧科技职业学院园林科技系制备；白介素－6（IL-6）、白介素-2（IL-2）肿瘤坏死因子－α（TNF-α）放射免疫试剂盒，购于北京北方生物技术研究所；分泌型免疫球蛋白（sIgA）放射免疫试剂盒，购于中国原子能科学研究所；一氧化氮（NO）、一氧化氮合成酶（NOS）测定试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所。

3.根据权利要求1所述的一种牡丹籽油对小鼠免疫功能影响的实验方法，其特征在于：在S4中，用RIA法测定小肠黏膜sIgA水平，脾脏中IL-2，IL-6、TNF-α水平，血清中NO含量采用硝酸还原酶法测定，血清中一氧化氮合成酶（NOS）活性采用比色法测定。

4.根据权利要求1所述的一种牡丹籽油对小鼠免疫功能影响的实验方法，其特征在于：在S5中，数据均以平均数±标准差（Mean±SD）表示，统计学处理用SPSS16.0进行One-WayANOVA检验，P<0.05表示差异显著，P<0.01表示差异极显著。

5.根据权利要求1所述的一种牡丹籽油对小鼠免疫功能影响的实验方法，其特征在于：在S6中，相对脾重的计算公式为：脾重/体重×100%，试验结果表明，如图1所示，与I组相比较，II、III、IV和V组均提高了小鼠的脾脏重量和相对脾脏重量，其中IV差异显著（P<0.05）。

6.根据权利要求1所述的一种牡丹籽油对小鼠免疫功能影响的实验方法，其特征在于：在S6中，如图2所示，与I组相比，各组血清NO及NOS水平均有所升高，其中III组血清NO水平显著提高（P<0.05）。

7.根据权利要求1所述的一种牡丹籽油对小鼠免疫功能影响的实验方法，其特征在于：在S6中，如图3所示，与I组相比，III组脾脏IL-2显著升高（P<0.05），II组脾脏TNF-α显著降低（P<0.05）；各组脾脏中IL-6水平均较I组升高，但统计结果差异也不显著（P>0.05）。

8.根据权利要求1所述的一种牡丹籽油对小鼠免疫功能影响的实验方法，其特征在于：在S6中，从图4可以看出，与I组相比较，各组肠道黏膜sIgA水平均提高，其中III组统计分析差异显著（P<0.05），试验结果表明：牡丹籽油能提高小鼠肠黏膜sIgA水平，能够影响小鼠肠道免疫功能。