[发明专利]一种卵巢切除术导致的食蟹猴骨质疏松模型的构建方法

说明书

本发明涉及生物医学研究技术领域，特别涉及一种卵巢切除术导致的食蟹猴骨质疏松模型的构建方法。该方案中通过双侧卵巢切除建立了食蟹猴骨质疏松模型，后通过检测血清骨转换相关指标、腰椎骨密度测定、松质骨骨组织形态学计量学测定及腰椎压缩测试评价各组骨质量，各参数表明去卵巢手术使骨吸收及骨形成参数均有增加，骨量及骨密度显著性降低，力学强度下降。本发明能够有效的建立一种卵巢切除术导致的食蟹猴骨质疏松模型，为医学进一步研究绝经期妇女骨质疏松提供治疗过程中可靠数据。

技术领域

本发明涉及生物医学研究技术领域，特别涉及一种卵巢切除术导致的食蟹猴骨质疏松模型的构建方法。

背景技术

骨质疏松是一种骨量低下的疾病，易发生骨折，好发于老年人群及绝经期妇女。造成的原因是骨微观结构变细、变疏、骨盐及有机质同时减少，可能影响全身性骨骼出现多发性骨折。基本机制主要由骨形成即成骨细胞活性和骨吸收即破骨细胞活性的不平衡所致。骨质疏松症给患者生活带来极大不便和痛若，治疗收效很慢，一旦骨折又可危及生命。老年骨质疏松症时，椎体压缩变形，脊柱前屈，肌肉疲劳甚至痉挛，产生疼痛。疼痛患者中的70％～80％疼痛沿脊柱向两侧扩散，仰卧或坐位时疼痛减轻，直立时后伸或久立、久坐时疼痛加剧，弯腰、咳嗽、大便用力时加重。

故急需构建一种模拟绝经期妇女的生理情况，卵巢切除术导致的食蟹猴骨质疏松模型，为医学进一步研究绝经期妇女骨质疏松提供治疗过程中可靠数据。

发明内容

鉴于以上问题，本发明提供了一种模拟绝经期妇女的生理情况，卵巢切除术导致的食蟹猴骨质疏松模型，为医学进一步研究绝经期妇女骨质疏松提供治疗过程中可靠数据。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：一种卵巢切除术导致的食蟹猴骨质疏松模型的构建方法，包括以下步骤：

A.术前给药及麻醉

选择各项检测指标在正常范围内的成年雌性食蟹猴进行实验。将12只食蟹猴随机分为2组，组间需要保证年龄、体重、腰椎骨矿物质含量(BMC)和骨密度(BMD)的均衡。第一组为双侧卵巢摘除手术组，第二组为假手术组(sham 组)。术前每只动物分别肌注一定剂量的抗生素，50mg/kg头孢曲松钠，0.05 mg/kg阿托品，5-10min后，对每只动物进行手术麻醉。

B.双侧卵巢切除术

动物麻醉后使用碘伏消毒皮肤，上至肋下，下至耻骨联合上，两侧至侧腹壁。医用手术铺巾铺在腹部，由布巾钳固定；在下腹中线作大约4cm左右的纵行切口，钝性分离皮下组织暴露腹正中线，在腹白线切开腹膜，钝性游离出一侧卵巢，提起卵巢，显露卵巢输卵管系膜、卵巢固有韧带，保持骨盆漏斗韧带呈伸展状态。沿卵巢基底部钳夹骨盆漏斗韧带血管、系膜及卵巢固有韧带，完整切除卵巢，交叉贯穿缝合残端。同样的方式切除另一侧卵巢；检查有无活动出血，无出血，连续缝合创面，关闭腹腔。假手术组：手术方式同双侧卵巢切除术，不切除卵巢，以切除卵巢周围部分脂肪替代。

C.术后护理

所有动物术后连续3天给予0.02mg/kg的镇痛剂丁丙诺啡，每日三次。所有动物手术结束后，连续3天给予50mg/kg的抗生素头孢曲松钠。麻醉恢复期动物允许自由的活动及完全负重，动物实验人员在麻醉恢复期须密切监控所有动物。

D.安乐死及取材

实验期结束后，将所有动物麻醉安乐死之后，L2腰椎于10％中性福尔马林保存用于骨组织形态计量学测定；椎骨L4取材后裹着纱布浸泡于生理盐水，覆盖着塑料薄膜，放在塑料袋中，储存在-20℃用于生物力学检测。

E.建模结果验证

动物采血，进行血清骨形成标记物、血清骨吸收标记物和血清骨吸收标记物的分析，进行DXA检测，Hologic APEX软件分析面积骨密度相关参数，骨组织形态计量学测定，定量组织形态学测定，生物力学测定及压缩试验。