[发明专利]一种荧光定量检测INHB的免疫层析试剂条及其制备方法

权利要求书

1.一种荧光定量检测INHB的免疫层析试纸条,其特征在于，所述的免疫层析试纸条包括有PVC底板，其特征在于，所述的PCV底板上依次设有样品垫、标记垫、包被膜、吸水纸，所述的标记垫和所述的样品垫相接，所述的包被膜和所述的标记垫相接，所述的吸水纸和所述的包被膜相接，所述包被膜包含检测线和质控线，检测线和质控线间隔4~8 mm；所述标记垫上喷涂有荧光微球标记的INHB单克隆抗体和荧光微球标记的亲和素，所述检测线包被有与所述荧光微球标记的INHB单克隆抗体处于不同表位的另一种INHB单克隆抗体，所述质控线包被有特异性识别亲和素的兔抗亲和素抗体。

2.如权利要求1所述的免疫层析试纸条,其特征在于，所述荧光微球的粒径为100~500 nm。

3.如权利要求1所述的免疫层析试纸条,其特征在于，所述荧光微球的激发波长为310~550 nm，发射波长为340~ 620 nm。

4.一种荧光定量检测INHB的免疫层析试纸条的制备方法, 其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：

(1)荧光微球标记蛋白的制备

取荧光微球，10000~15000 rpm第一次离心5~15分钟，第一次离心分离得到的沉淀物用10~100 mM、 pH6.0~7.0磷酸盐缓冲液调节浓度为0.1%~1%，并超声分散；加入终浓度为0.1~5 mg/mL的碳二亚胺，混匀，再加入终浓度为0.1~5 mg/mL的N-羟基琥珀酰亚胺，混匀；室温孵育20~40分钟后10000~15000 rpm第二次离心5~15分钟，第二次分离得到的沉淀物用10~100 mM pH6.0~7.0磷酸盐缓冲液溶解，将复溶后的荧光微球超声分散，按照0.1~1.0mg/mL荧光微球的比例分别加入INHB单克隆抗体和亲和素，混匀后室温旋转混合反应1.5~3小时，10000~15000 rpm第三次离心离心5~15分钟，第三次离心分离得到的沉淀物用10~40mM、pH 7.0-8.0含10~40 mM乙醇胺和0.05%-1%酪蛋白的Tris-HCl复溶，超声分散后旋转混合反应0.5~1小时;

10000~15000 rpm第四次离心5~15分钟，第四次离心分离得到沉淀物用微球保存液复溶，2~8℃保存；

(2)样品垫的预处理

将样品垫用封闭液浸泡后，置于湿度＜20%的40~50℃的烘箱，干燥12~24 h后于2~30℃密封保存，所述封闭液含0.1~1%的Tris、0.1~1%的Tween20、0.1~1%的BSA、0.1~2%的PVP40和0.005~0.05%的鼠抗人红细胞；

(3)标记垫的制备

将荧光微球标记的INHB单克隆抗体和荧光微球标记的亲和素用标记垫处理液喷涂在标记垫上，所述标记垫处理液中含有0.2~2%的酪蛋白、5%~20%的海藻糖、0.1~1%的S9、0.1~0.5%的PEG6000、0.02~0.05%的Proclin300和0.01~0.05M、pH 7.4的PBS缓冲液，将制备好的标记垫置于湿度＜20%的40~50℃的烘箱，干燥12~24 h后于2~30℃密封保存；

(4)包被膜的制备

分别将另一INHB单克隆抗体和兔抗亲和素抗体用包被缓冲液调节浓度为0.5~2 mg/mL，将INHB单克隆抗体喷到包被膜上的检测线，将兔抗亲和素抗体喷到包被膜的质控线，所述INHB单克隆抗体和兔抗亲和素抗体的用量按膜包被液量均为0.1~0.2 μL/mm，检测线和质控线间隔4~8 mm，湿度＜20%的40~50℃的烘箱，干燥24~72 h后于2~30℃密封保存，备用；

(5)在底板上顺次相互搭接地黏贴样品垫、标记垫、包被膜和吸水纸得到试纸板，按照切割要求切割成3~4 mm宽度的试纸条。

5.如权利要求4所述的制备方法, 其特征在于，所述荧光微球标记的INHB单克隆抗体的浓度为0.1~1.0 mg/mL，按照稀释比例为5%~20%稀释后，喷量为3~6 μL/cm喷涂至标记垫上。

6.如权利要求4所述的制备方法, 其特征在于，所述荧光微球标记的亲和素的浓度为0.1~1.0 mg/mL，按照稀释比例为0.5%~5%稀释后，喷量为3~6 μL/cm喷涂至标记垫上。

7.如权利要求4所述的制备方法, 其特征在于，所述包被膜检测线上包被的INHB单克隆抗体的浓度为0.5~2 mg/mL。

8.如权利要求4所述的制备方法, 其特征在于，所述质控线上包被的兔抗亲和素抗体的浓度为0.5~2 mg/mL。