[发明专利]一种臧酋猴血型的鉴定方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种臧酋猴血型的鉴定方法。

背景技术

血型是人类血液的主要特征之一，ABO血型抗原广泛存在于人类红细胞和组织中，是最主要的红细胞血型系统。臧酋猴也有ABO血型系统，但和人类不同，臧酋猴的ABO血型抗原都表达在组织器官内，其外周血红细胞上不表达AB抗原，或是表达非常弱。这些血型抗体与移植器官上表达的AB抗原结合同样可以造成类似于人类ABO血型不合的同种异体器官移植排斥反应。

由于臧酋猴的ABO血型抗原并不表达在外周血红细胞上，且血浆中的纤维蛋白和人-猴种属间非特异性抗体都会对部分检测结果产生干扰，容易产生假阳性或假阴性结果，所以臧酋猴的血型鉴定一直都较难。

目前，臧酋猴的血型鉴定方法有：(1)通过传统试管法抗球蛋白试验和毛果芸香碱用药后唾液的AB抗原鉴定，但这两种方法不易标准化，认为因素较多，容易出现假阳性或者假阴性，造成血型判断不能明确或者判断错误。(2)组织切片免疫组织化学染色法，此方法对动物的损伤较大，一般只用于回顾验证性研究，不能满足繁育种群进行血型鉴定的要求。(3)卡式凝胶法，该方法成本高，离心需要专用离心机，且专用离心机不能用于其他试管离心，具有一定的局限性。

发明内容

针对现有技术中的上述不足，本发明提供了一种臧酋猴血型的鉴定方法，可有效解决现有技术中成本高，具有局限性，鉴定不准确，易出现假阳性或者假阴性的问题。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种臧酋猴血型的鉴定方法，包括以下步骤：

(1)采集臧酋猴后肢浅静脉血置于含多孔棉的容器中，以120-130r/min的转速震荡10-15min；

(2)吸取步骤(1)处理后的血液置于红头采血管中，室温静置40-60min，然后置于4℃过夜，再室温放置30-40min，于3500-6000r/min离心10-15min，吸取上清液；

(3)吸取新鲜的正常人O型血于离心管中，加入9-10倍体积，浓度为0.9％的生理盐水，轻微摇匀，于1500-2000r/min离心15-20min，弃去上清液，然后用0.9％的生理盐水清洗沉淀物3-4次；

(4)将步骤(2)所得上清液与步骤(3)所得物按体积比为1:1混合，并于37℃孵育30-40min，再于1300-1500r/min离心8-10min，取上清液；

(5)步骤(4)所得上清液与保护液按体积比为3-4:1-2混合；其中，保护液包括5％牛血清蛋白、5％蔗糖、5％PVP和含5％小牛血清的磷酸盐缓冲液，磷酸盐缓冲液浓度为5mM，pH值为7.4；

(6)将步骤(5)所得物分别与正常人的A型血红细胞和B型血红细胞按体积比为1:1混合，轻微摇匀后于1000r/min离心1min，观察凝集现象。

若只与A型血红细胞混合后出现凝集现象，则鉴定为B型血；若只与B型血红细胞混合后出现凝集现象，则鉴定为A型血；若两种混合条件下均出现凝集现象，则鉴定为O型血；若两种混合条件下均不出现凝集现象，则鉴定为AB型血。

进一步地，步骤(1)中离心转速为120r/min，离心时间为15min。

进一步地，步骤(2)中室温静置60min，然后置于4℃过夜，再室温放置30min，于3800r/min离心10min。

进一步地，步骤(3)中向正常人O型血红细胞中加入9倍体积，浓度为0.9％的生理盐水，轻微摇匀，于1500r/min离心15min。

进一步地，步骤(4)中孵育时间为30min，离心速度为1372r/min，离心时间为10min。

进一步地，步骤(4)所得上清液与保护液按体积比为3:1混合。

本发明提供的臧酋猴血型的鉴定方法，具有以下有益效果：

(1)将采集的血液置于含多孔棉的容器中，可在摇床中不断震荡，血液中的纤维蛋白原转变成不溶性纤维蛋白时，生成的不溶性纤维蛋白接触到多孔棉后可被多孔棉吸附，可有效去除纤维蛋白原，避免其对测试结果的干扰。

(2)将经过多孔棉处理后的血液在室温下静置，然后再于4℃静置过夜过夜，最后再放置室温静置，接着离心，可有效去除血清中的杂质，得到清亮的血清。

(3)清亮血清与O型红细胞混合，吸附处理后可消除人-猴种属间非特异性抗体，同时进一步去除纤维蛋白原。