[发明专利]细胞角蛋白19片段的板式化学发光法检测试剂盒及制备方法

说明书

本发明涉及一种细胞角蛋白19片段的板式化学发光法检测试剂盒，包括的试剂：生物素标记的CYFRA21‑1抗体溶液、抗生物素抗体包被的酶标板、辣根过氧化物酶标记的CYFRA21‑1抗体溶液、CYFRA21‑1校准品A‑F、浓缩洗液、底物液A、底物液B。本发明的主要设计思路是在化学发光免疫分析基础上，通过引入具有抗生物素抗体‑生物素体系，稳定试剂盒检测特异性的同时，大幅增加了检测灵敏度以及检测时间。改进了高温振荡式抗生物素抗体包被工艺，从而降低抗体/抗原使用量的同时，简化了试剂生产流程，缩短了生产周期。

技术领域

本发明属于生物试剂盒材料领域，具体涉及一种用于细胞角蛋白19片段的定量检测试剂盒及制备方法，可快速、简便、高效、灵敏地对人血清样本中细胞角蛋白19片段的定量检测。

背景技术

细胞角蛋白19片段（Cytokeratin-19-fragment CYFRA21-1)是肺泡上皮细胞凋亡时，其细胞中含有的角蛋白的碎片降解后变成可溶性物质而进入血液，使血中含量增高。

CYFRA21-1是非小细胞肺癌的首选标志物,特别是鳞状上皮细胞癌目前首选的肿瘤标志物，灵敏度可达60%，特异性可达95%。它对非小细胞肺癌(NSCLC)的早期诊断、疗效监测和预后判断均有重要意义。CYFRA21-1常用来监测非小细胞肺癌的病程和预后，在非小细胞肺癌病人体内，血中CYFRA21-1水平显著升高。

提示肿瘤的晚期或预后差；如果对非小细胞肺癌的治疗效果好，其水平会很快下降或恢复到正常水平，如值不变或轻度减低提示肿瘤未完全去除或有多发性肿块存在。

为了提高肿瘤诊断水平和改善治疗效果，从检测角度上来说，目前临床上用于测定CYFRA21-1的方法较少，主要有酶联免疫技术和化学发光技术等。其中，化学发光技术兴起于上个世纪 80 年代，是继酶联免疫技术和放射性免疫技术之后发展起来的新兴技术，由于其高灵敏度、高特异性，同时方法简便、快速，标记结合物稳定，相对时间分辨荧光免疫法分析成本低廉、操作简便，无放射性同位素损伤和污染等特点，得到了飞速发展。

本试剂盒主要用于对相关恶性肿瘤患者进行动态监测以辅助判断疾病进程或治疗效果，不能作为相关恶性肿瘤早期诊断或确诊的依据，不宜用于普通人群的肿瘤筛查。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对上述现有技术提供一种板式化学发光法检测人血清CYFRA21-1的试剂盒及其制备方法，研发和优化了与血清学免疫反应原理相关的各种关键技术，从而提高针对临床患者体内的CYFRA21-1检测灵敏度和准确性，开发出灵敏度高、稳定性好、生产便捷、操作方便的板式化学发光诊断试剂。

本发明的主要设计思路是在化学发光免疫分析基础上，通过引入具有抗生物素抗体-生物素体系，稳定试剂盒检测特异性的同时，大幅增加检测灵敏度。

本发明实现上述技术目的所采用的技术方案为：

一种细胞角蛋白19片段的板式化学发光法检测试剂盒，其特征在于：包括的试剂有生物素标记的CYFRA21-1抗体溶液、抗生物素抗体包被的酶标板、辣根过氧化物酶标记的CYFRA21-1抗体溶液、CYFRA21-1校准品A-F、浓缩洗液、底物液A、底物液B。

上述生物素标记的CYFRA21-1抗体溶液的浓度为0.01～1.0μg/ml，所述抗生物素抗体包被的酶标板的抗生物素抗体的包被浓度为0.2～8.0μg/ml，所述辣根过氧化物酶标记的CYFRA21-1抗体溶液的浓度为0.02～3.0μg/ml。

上述CYFRA21-1校准品A - F点是CYFRA21-1（北京华信行）以pH值为7.4的Tris-HCl缓冲液配制得到的，浓度分别为0,1,5,20,60,120ng/mL。

上述生物素标记的CYFRA21-1抗体溶液的制备过程：生物素标记的CYFRA21-1抗体加入到pH值为7.4的缓冲液中，调节到适宜倍数，混匀得到。