[发明专利]一种烟草中12种Amadori化合物的测定方法

说明书

本发明涉及一种烟草中12种Amadori化合物的测定方法，属于烟草成分检测技术领域。本发明烟草中12种Amadori化合物的测定方法，包括以下步骤：将烟末样品在甲醇溶液中萃取20～40min，之后离心取上清液过滤，得滤液；将所得滤液稀释5～20倍后，得待测液；将待测液进行HPLC‑MS/MS测定，采用外标法定量。本发明测定方法可同时对烟草中12种无标样的Amadori化合物进行近似定量检测，操作简单、快速、重现性好、灵敏度高，对烟草品质评价、卷烟配方开发具有着重要指导意义。

技术领域

本发明涉及一种烟草中12种Amadori化合物的测定方法，属于烟草成分检测技术领域。

背景技术

Amadori化合物是由还原糖和氨基酸(或其它含氨基基团化合物)经缩合、脱水、Amadori重排得到的一类美拉德反应的中间产物，即1-氨基-1-脱氧-2-酮糖。据报道，在烤烟烟叶中Amadori化合物总量在2％以上，是重要的烟草香味成分前体物，对卷烟的感官品质具有重要作用。

关于Amadori化合物的测定，国外最早采用氨基酸分析仪、GC进行测定，但均存在一定问题，例如，氨基酸分析仪存在分离度不足、定性不准确、干扰严重的问题；而GC方法衍生化将引入多个异构体，难以进行定量。

2015年，贾春晓等人在《质谱学报》上报道了一篇液相色谱-串联质谱法同时测定烟草中6种Amadori化合物的文章，测定指标数量较少。

公开号为CN103499658A的中国发明专利公开了一种烟草中Amadori化合物的同时测定方法，该方法的样品前处理步骤包括萃取、过滤、净化、HPLC-MS/MS测定步骤。其中净化步骤需要向滤液中加入正己烷进行萃取多次，再将甲醇-水相浓缩至干，用甲醇水溶液再定容，过有机滤膜，样品前处理步骤繁琐，需要引入多步的环己烷萃取，且样品前处理步骤中需要对甲醇-水溶液进行浓缩蒸干，而甲醇-水溶液的浓缩蒸干过程是必须引入进行加热的。但是，Amadori化合物由糖和氨基酸(或其他含氨基化合物)反应生成的中间产物，在加热的条件下，会导致Amadori化合物进一步分解生成小分子的醛、酮、酸等物质，致使部分Amadori化合物不能被检测到。

公开号为CN 106353434A的中国发明专利公开了一种定量测定烟草中10种有标样的Amadori化合物的分析方法，公开了一种简单、快速、前处理方法温和、准确度及精密度高且可同时定量测定烟草中多种Amadori化合物的分析方法。

但是，Amadori化合物市售标样价格昂贵，而且目前仅有10种左右。然而，目前常用氨基酸分析方法报道的氨基酸种类有21种，加上氨，理论上可以形成至少22种葡萄糖型Amadori物质。但是鉴于标样缺乏，目前未见任何关于其它无标样Amadori化合物定量方法的相关报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种烟草中12种Amadori化合物的测定方法，实现对12种Amadori化合物进行同时测定。

为实现上述目的，本发明的技术方案是：

一种烟草中12种Amadori化合物的测定方法，包括以下步骤：

1)将烟末样品在甲醇溶液中萃取20～40min，之后离心取上清液过滤，得滤液；

2)将步骤1)所得滤液稀释5～20倍后，得待测液；

3)将待测液进行HPLC-MS/MS测定，采用外标法定量；所述Amadori化合物为Fru-Amb、Fru-Arg、Fru-Asp、Fru-Cys、Fru-Gln、Fru-Gly、Fru-His、Fru-Lys、Fru-Met、Fru-Ser、Fru-Thr和Fru-Tyr。

步骤1)中烟末样品为将烟叶或烟丝样品磨成粉，过筛而得。所述过筛为过40目筛。

上述烟叶为烤烟烟叶、香料烟烟叶或白肋烟烟叶。