[发明专利]一种烟草中12种Amadori化合物的测定方法

权利要求书

1.一种烟草中12种Amadori化合物的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将烟末样品在甲醇溶液中萃取20~40min，之后离心取上清液过滤，得滤液；

2）将步骤1）所得滤液稀释5~20倍后，得待测液；

3）将待测液进行HPLC-MS/MS测定，采用外标法定量；所述Amadori化合物为Fru-Amb、Fru-Arg、Fru-Asp、Fru-Cys、Fru-Gln、Fru-Gly、Fru-His、Fru-Lys、Fru-Met、Fru-Ser、Fru-Thr和Fru-Tyr；

步骤3）中进行HPLC-MS/MS测定前，先通过HPLC-Q-TOF-MS二级质谱，确定上述12种Amadori化合物的定性及定量离子对参数，然后将确定的定性及定量离子对参数输入HPLC-MS/MS的MRM模式，再进行HPLC-MS/MS测定；

所述外标法定量采用的标准物质为与待测物质保留时间接近且丰度近似的Amadori标准物质；所述Amadori标准物质为Fru-Glu、glucosamine、Fru-Ala中的两种或三种。

2.根据权利要求1所述的烟草中12种Amadori化合物的测定方法，其特征在于，步骤1）中每50~200mg的烟末样品对应20~40mL甲醇溶液。

3.根据权利要求1所述的烟草中12种Amadori化合物的测定方法，其特征在于，步骤1）甲醇溶液中甲醇与水的体积比3:7。

4.根据权利要求1所述的烟草中12种Amadori化合物的测定方法，其特征在于，步骤1）中离心为在5000～10000rpm转速下离心3～10min。

5.根据权利要求1所述的烟草中12种Amadori化合物的测定方法，其特征在于，步骤1）中过滤为采用0.22μm孔径的滤膜过滤。

6.根据权利要求1所述的烟草中12种Amadori化合物的测定方法，其特征在于，步骤2）中稀释所用稀释液为甲醇或乙腈或甲醇与乙腈以任意比例混合的混合液。

7.根据权利要求1所述的烟草中12种Amadori化合物的测定方法，其特征在于，步骤3）中HPLC-MS/MS的测定条件为：色谱柱：Atlantis T₃色谱柱，柱温：25℃；进样量：5μL；流速：600μL/min；流动相：A 0.2%的甲酸溶液，B乙腈；洗脱梯度：0~0.1min，10.5%B到22%B梯度洗脱；0.1-10min，22%B；离子源：电喷雾离子源；扫描模式：正离子扫描；检测方式：多反应监测；气帘气压力：15psi；碰撞气压力：7psi；喷雾电压：5500V；雾化温度：550℃；雾化气压力：60psi；辅助气压力：75psi。