[发明专利]与伪狂犬病病毒gB蛋白结合的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明涉及特异性结合伪狂犬病病毒gB蛋白鼠单克隆抗体的可变区序列，其为鼠单克隆抗体3C12的可变区序列或鼠单克隆抗体5G12的可变区序列；本发明还涉及由鼠单克隆抗体3C12可变区序列中的重链可变区序列或其保守性变异体，和/或轻链可变区序列或其保守性变异体组成的抗体，及由鼠单克隆抗体5G12可变区序列中的重链可变区序列或其保守性变异体，和/或轻链可变区序列或其保守性变异体组成的抗体。含所述抗体的ELISA检测试剂盒，克服了PRVgB蛋白与其它蛋白串联表达或融合表达后无法准确定量、预期表达效果无法验证的技术难题，解决了配制疫苗的关键问题。同时，所述抗体可用于免疫组化检测。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及与伪狂犬病病毒gB蛋白结合的单克隆抗体及其应用。

背景技术

伪狂犬病，又称Aujeszky氏病，是由疱疹病毒科(Herpesviridae)α亚科中的猪疱疹病毒Ⅰ型(Suid herpesvirus 1strain，亦称伪狂犬病病毒Pseudorabies virus，PRV)所引起的猪、牛、羊、犬、猫、兔、鼠、野猪、貂、熊和狐等多种家畜、野生动物的一种以发热、奇痒(除猪外)及脑脊髓炎为主症的急性传染病。

猪的伪狂犬病在我国广泛存在，危害严重，是制约规模化猪场生产的主要疾病之一，可引起妊娠母猪流产、死胎或木乃伊胎，仔猪出现神经症状、麻痹、特别地20周龄内感染后100％死亡率，以及大中猪呼吸道症状等。研究表明以PRVgB、gC、gD蛋白为主的亚单位疫苗能够给免疫动物特别是猪提供相应的保护，不仅能使猪免遭猪伪狂犬病的侵袭，还能使猪免受猪伪狂犬变异株所引发的伪狂犬病，特别地以三种蛋白中的两者或三者的串联表达或融合表达效果最为显著。但通过基因工程手段串联表达或融合表达后的蛋白存在的难题在于，其仅能通过常用的BCA或Bradford方法定量表达后的总蛋白含量，无法准确定量各自蛋白表达的含量，进而不能确定各蛋白是否达到预期的表达效果，导致无法配制亚单位疫苗。

目前PRV病原的临床检测主要为聚合酶链式反应PCR方法，此方法中涉及的引物、酶等多为国外进口，价格较为昂贵，使得养殖场特别是小规模或散户养殖望而却步。另外此方法虽广泛用于疫病诊断，但由于其不能在组织和细胞内进行明确定位、无法跟踪病原在机体的动态分布、半定量检测，从而限制了PCR在病理组织学上的应用。

现有技术中，能够用于免疫组化(Immunohistochemistry，IHC)的抗体会在其使用说明书中作出明确标识和注明。按说明所示，大多数抗体都不能用于IHC检测。虽然个别抗体标明可用于IHC，但在实际应用发现并非如此。这些抗体均为研究用试剂，没有经过大量样本临床病例试验或验证，没有对病毒感染组织或细胞的定位检测能力，为流行病学的准确调查和后期的预防、治疗带来麻烦。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足提供了能够与伪狂犬病毒gB蛋白结合的单克隆抗体。含所述单克隆抗体的ELISA检测试剂盒，克服了PRVgB蛋白与其它蛋白串联表达或融合表达后无法准确定量、预期表达效果无法验证的技术难题，解决了配制疫苗的关键问题。同时，所述单克隆抗体还可用于免疫组化检测，解决了PCR不能在组织和细胞内进行明确定位、无法跟踪病原在机体的动态分布的问题。

为此，本发明第一方面提供了特异性结合伪狂犬病病毒gB蛋白的可变区序列，其为鼠单克隆抗体3C12的可变区序列，所述鼠单克隆抗体3C12的可变区序列中，重链可变区氨基酸序列为：序列SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，或序列SEQ ID NO.2经一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰获得的保守性变异体；轻链可变区氨基酸序列为：序列SEQ IDNO.4所示的氨基酸序列，或序列SEQ IDNO.4经一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰获得的保守性变异体；