[发明专利]用动物肠粘膜生产肠道微生物粉并联产小分子肽、肝素钠、碱性磷酸酶的方法及应用

权利要求书

1.一种用动物肠粘膜生产肠道微生物粉并联产小分子肽、肝素钠、碱性磷酸酶的方法，其特征在于：是以动物肠粘膜为原料，应用现代生物过程集成化技术，在同一生产工艺流程中，生产出肠道微生物粉、小分子肽、肝素钠、碱性磷酸单酯酶4种功能成份，包括以下步骤：

（1）将动物肠粘膜粉碎，打浆；

（2）加入2-3倍体积的0.9%生理盐水溶解；

（3）用离心机3000-5000 r/min离心10-15min，收集离心液，去除不溶物；

（4）将收集的离心液，依次过1.0µm、0.65µm、0.22µm的滤膜，收集过滤液和膜上未过滤物；合并膜上未过滤物，经蒸发干燥即为肠道微生物粉；

（5）合并收集的膜过滤液，经过截留分子量一万的超滤装置，分别收集透过液和截留液，透过液即小分子肽液，浓缩后即为口服液原料；

（6）将步骤（5）中的截留液，加正丁醇沉淀；用高速离心机离心，分别收集离心液和固态离心物；

（7）将步骤（6）中收集的离心液，用等体积冷丙酮沉淀，出现沉淀物后，于速度3000-6000r/min离心5分钟，收集沉淀物，此沉淀物离心后立即加热到丙酮沸点，使丙酮浑发；

（8）将步骤（7）收集的沉淀物加入3-5倍量的0.05 mol/L，Tris—HC1缓冲液，该缓冲液PH7.5，含0.01mol/L氯化镁，0.01mol/L氯化钠，0.01mol/L氯化锌；充分混合搅拌，得碱性磷酸单酯酶粗液；

（9）将步骤（6）高速离心机收得的固态物用于生产肝素钠。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：将步骤（8）中所得的碱性磷酸单酯酶粗液经上柱、洗脱、收集、真空干燥得碱性磷酸单酯酶，具体过程如下：

A、上DEAL-separ0se4B柱，此柱用pH7.5、0.05 mol/L的Tris-HC1缓冲液平衡过；

B、用含有氯化钠的pH7.5的0.05 mol/L，Tris-HC1缓冲液线性梯度洗脱；

C、用280nm检测洗脱峰，收集峰高洗脱液；

D、用磷苯二钠为底物检测收集洗脱液酶活性，合并活性酶洗脱液；

E、将上述活性酶用旋转薄板蒸发器在35℃下真空干燥得粉剂，即碱性磷酸单酯酶。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（9）中生产肝素钠的具体方法如下：

A、将固态物用三倍量的0.9%生理盐水溶解；

B、用40%NaOH溶液调pH至8.0-9.0，加热搅拌到60℃保温二小时；

C、按比例加入0.20-0.25%的固态胰蛋白酶，酶解三小时，温度保持在37℃，pH在8.0-9.0之间；

D、趁热过滤，收集过滤液，用10%HCl调节pH5.5-6.0，立即升温至95℃，在搅拌下按比例5%加入氯化钠；

E、使蛋白质与肝素钠分离；

F、保温，当出现有沉淀物下降，立即过滤收滤渣，处理后作动物蛋白饲料；滤液在用6000-10000 r/min离心，收集离心液，将离心液冷却到5-8℃；

G、缓慢过D-254树脂柱，控制流速，使肝素钠充分被树脂吸附；该D-254树脂装柱事先要用酸、碱平衡好；

H、吸附罢的柱子，用3%的氯化钠液洗涤，除去非肝素钠物质；

I、再用5%的氯化钠液洗脱柱子，收集洗脱液；将收集的洗脱液加入乙醇，使溶液酒精终浓度达到43-45%，静置6小时，收集沉淀物；

J、沉淀物用无水乙醇脱水，再用丙酮脱水,脱水的肝素钠在50℃真空干燥即得粗品肝素钠。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤（4）中，采用生理盐水收集过滤液和膜上未过滤物。

5.一种由权利要求1所述方法生产的肠道微生物粉移植进入人体肠内的应用，既可补充有益菌，使有益菌与有害菌在肠道处于平衡，还恢复了肠道与微生物的微环境，可达到延年益寿的作用。