[发明专利]海洋曲霉SCSIO 05879制备Versicoloids A和B及在抗胶孢炭疽菌药物中的应用

说明书

本发明公开了海洋曲霉SCSIO 05879制备Versicoloids A和B及在抗胶孢炭疽菌药物中的应用。Versicoloids A和B，结构式如式(I)所示，其是由曲霉(Aspergillus sp.)SCSIO 05879发酵产生，对胶孢炭疽病菌、水稻稻瘟病菌和香蕉枯萎病菌有生长抑制活性，对其进行生物工程改造或化学结构修饰有望开发成为抗植物病原菌新药。

本分案申请为申请号：201610046509.9，发明名称：抗生素Versicoloids A和B及其制备方法和在制备抗植物病原菌药物中的应用，申请日：2016年01月22日的专利申请的分案申请。

技术领域：

本发明属于海洋天然产物领域，具体涉及海洋曲霉SCSIO 05879制备Versicoloids A和B及在抗胶孢炭疽菌药物中的应用。

背景技术：

目前，农业生产上存在的植物病原菌主要有胶孢炭疽病菌、水稻稻瘟病菌、香蕉枯萎病菌、黄瓜疫霉枯萎病菌、玉米大斑病菌、玉米小斑病菌、甘蔗凤梨病菌等，其分布广泛，对农作物的生产危害极大。随着人民生活水平的不断提高，对食用农副产品的品质要求也越来越高。因此，从天然产物中筛选和寻找防治植物病原菌的活性先导化合物，对人类健康、农业与环境的可持续发展都具有极其重要的意义。

发明内容：

本发明的第一个目的是提供一类新的具有抗植物病原菌活性的生物碱化合物Versicoloids A和B。

本发明的一类新的生物碱化合物Versicoloids A或B，其结构如式(I)所示：

本发明的第二个目的是提供生物碱化合物Versicoloids A和B的制备方法。

本发明的Versicoloids A和B是从曲霉(Aspergillus sp.)SCSIO 05879的发酵培养物中制备分离得到的。

本发明优选通过以下方法从曲霉(Aspergillus sp.)SCSIO 05879的发酵培养物中制备得到Versicoloids A和B，具体步骤如下：

制备曲霉(Aspergillus sp.)SCSIO 05879的发酵培养物，分离得到上清发酵液和沉淀菌丝体，上清发酵液用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取液经减压浓缩得发酵液浸膏；沉淀菌丝体用丙酮水溶液超声浸提，提取液经减压蒸馏后，再用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取液经减压浓缩得菌丝体浸膏；合并发酵液浸膏和菌丝体浸膏得粗浸膏，经硅胶柱层析分离，采用二氯甲烷/甲醇从100:0，99:1，98:2，97:3，95:5，90:10，80:20，50:50，0:100,v/v梯度洗脱，收集二氯甲烷/甲醇100：0v/v洗脱的组分fr1，经Sephadex LH-20柱层析，以二氯甲烷/甲醇1:1,v/v为洗脱剂，洗脱后的产物经纯化得到Versicoloid A和Versicoloid B。

所述的洗脱后的产物经纯化得到Versicoloid A和Versicoloid B具体是以250和340nm波长做检测、采用4mL/min的流速，以甲醇：水(65:35,v/v)进行等梯度洗脱进行半制备高效液相分离，HPLC(Sunfire,Prep C₁₈OBD,10×250mm,5μm)，得到Versicoloid A(4.6mg，保留时间t_R 22.6min)和Versicoloid B(6.1mg,保留时间t_R 16.1min)。