[发明专利]一种基于格氏嗜盐碱杆菌Argonaute靶向激活基因转录的方法

权利要求书

1.一种NgAGO-VP64融合蛋白，其特征在于，是将VP64融合到NgAGO的C末端或N末端，并进行人源化密码子优化所得，所述融合蛋白的序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。

2.一种表达如权利要求1所述NgAGO-VP64融合蛋白的质粒，其特征在于，是将NgAGO-VP64融合蛋白基因克隆到表达载体获得。

3.一种如权利要求1所述NgAGO-VP64融合蛋白或如权利要求2所述质粒在基因编辑方面的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述质粒在基因编辑方面的应用为在制备NgAGO基因编辑工具方面的应用。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述基因编辑是指激活内源基因的表达。

6.一种基于格氏嗜盐碱杆菌Argonaute靶向激活内源基因转录的NgAGO基因编辑工具，其特征在于，包括权利要求1所述NgAGO-VP64融合蛋白或权利要求2所述质粒，还包括导向DNA，所述导向DNA为SEQ ID NO.3～12所示序列片段中的任一种或几种的混合物。

7.一种基于格氏嗜盐碱杆菌Argonaute靶向激活内源基因转录的方法，其特征在于，是利用权利要求6所述NgAGO基因编辑工具与转染试剂共转染细胞。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.细胞传代培养至指数增长期，转染前0.5～2小时，将细胞培养基换为无血清培养基，孵育0.5～2小时；

S2.将NgAGO-VP64融合蛋白质粒和导向DNA稀释到无血清培养基中，转染试剂稀释到无血清培养基中，然后将两者混合，室温静置20～30分钟后，加入细胞中，2～4小时后加入血清至终浓度为8～15％；

S3.第二天重复转染，但只需转染导向DNA。