[发明专利]IL‑6定量检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及定量检测技术领域，具体而言，涉及一种IL-6定量检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

白细胞介素6(interleukin-6，IL-6)是由212个氨基酸组成的糖蛋白，机体受炎症刺激后由T细胞、B细胞、单核巨噬细胞及内皮细胞等分泌。IL-6是一种多效应细胞因子，它有多种生物学活性，包括介导前感染反应和细胞保护功能。IL-6参与许多疾病的发生和发展，其血浆水平与炎症、病毒感染、自身免疫疾病密切相关，它的变化比CRP更早。目前认为是炎症、脓毒症的早期敏感性“警示”标志物及慢性炎症的量化标志物。

目前IL-6的检测方法主要有化学发光免疫分析法和电化学发光免疫分析法。两种方法均采用双抗体夹心法，不同之处为标记物不同：化学发光法为碱性磷酸酶；电化学发光法为钌。化学发光免疫检测方法代表试剂有：美国贝克曼公司的白介素6测定试剂盒(化学发光法)，该试剂盒主要组成部分为包被有羊抗大鼠IgG的顺磁性微粒，山羊抗人IL-6碱性磷酸酶(牛)结合物；英国西门子公司的白介素-6测定试剂盒(化学发光法)，该试剂盒主要组成部分有包被有单克隆鼠抗IL-6抗体的包被珠，碱性磷酸酶(小牛肠)标记的多克隆羊抗IL-6抗体。电化学发光免疫检测方法代表试剂为德国罗氏的白介素6检测试剂盒(电化学发光法)，该试剂盒主要组成部分为包被链霉亲合素的磁珠微粒、生物素化的抗白介素-6抗体、钌标记的抗白介素-6抗体。

化学发光法及电化学发光法能够准确、快速检测出结果，但该方法仪器成本相对较高，需要特定的化学发光仪器，并且对实验室操作人员的要求相对较高，因此在临床上无法真正普及和使用，只有一些相对较大的实验室才具备相应的条件。

因此，临床需要研发一种敏感性高、特异性强、操作简便快捷，低成本的适合临床推广的IL-6的检测方法。

发明内容

本发明旨在提供一种IL-6定量检测试剂盒及其制备方法，以解决现有技术中IL-6定量检测成本高、操作复杂的技术问题。

为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种IL-6定量检测试剂盒。该IL-6定量检测试剂盒包括：偶联有IL-6抗体的磁微球试剂，反应稀释液试剂和IL-6校准品。

进一步地，偶联有IL-6抗体的磁微球试剂包含：偶联有IL-6抗体的磁微球和基质溶液，其中，基质溶液包括：稳定剂0.5～20g/L，促凝剂2～200g/L，表面活性剂0.1～10mL/L，防腐剂0.5～5mL/L和10～50mmol/L磷酸盐缓冲液，基质溶液pH值为7.0～9.0。

进一步地，偶联有IL-6抗体的磁微球所用的磁微球为顺磁性微球，粒径为100～200nm，偶联有IL-6抗体的磁微球在基质溶液中的质量浓度为1～4mg/mL。

进一步地，稳定剂为牛血清白蛋白和/或酪蛋白；促凝剂为蔗糖和/或聚蔗糖-400；表面活性剂为吐温-20和/或曲拉通X-100；防腐剂为Proclin300。

进一步地，偶联有IL-6抗体的磁微球试剂包含：稳定剂为5g/L的牛血清白蛋白和5g/L的酪蛋白，促凝剂为100g/L的蔗糖和50g/L的聚蔗糖-400，表面活性剂为1mL/L的吐温-20和1mL/L的曲拉通X-100，防腐剂为1mL/L的Proclin300，25mmol/L磷酸盐缓冲液，基质溶液pH值为7.4；偶联有IL-6抗体的磁微球在基质溶液中的质量浓度为2mg/mL。

进一步地，偶联有IL-6抗体的磁微球中IL-6抗体与磁微球是采用EDC-NHS法偶联的。

进一步地，反应稀释液试剂包含：稳定剂0.5～20g/L，促凝剂2～50mL/L，表面活性剂0.1～3mL/L，防腐剂0.5～5mL/L和磷酸盐缓冲液10～50mmol/L，反应稀释液试剂的pH值为7.0～9.0。

进一步地，稳定剂为牛血清白蛋白，促凝剂为聚乙二醇8000，表面活性剂为吐温-20，防腐剂为Proclin300。

进一步地，反应稀释液试剂包含：稳定剂为5g/L的牛血清白蛋白，促凝剂为20mL/L聚乙二醇8000，表面活性剂为1mL/L的吐温-20，防腐剂为1mL/L的Proclin300，缓冲溶液为25mmol/L的磷酸盐缓冲液，反应稀释液试剂的pH值为7.4。

进一步地，IL-6校准品包含：pH7.4的50mmol/L的磷酸盐缓冲液、重组人源IL-6、10g/L的牛血清白蛋白和1mL/L的防腐剂。

进一步地，IL-6校准品的浓度范围为0～1000pg/mL。