[发明专利]一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞培养体系

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞培养体系

背景技术

间充质干细胞是普遍存在于不同组织的多潜能成体干细胞，目前已经从骨髓、脂肪、牙髓、羊膜、绒毛膜、蜕膜、脐带、脐血等组织中分离培养出间充质干细胞。已有研究表明间充质干细胞具有分化能力强，倍增时间短，具有免疫调节作用和低下的免疫原性，易于转染的特性，是再生医学的一种理想种子细胞和基因治疗载体，已成为干细胞临床转化应用研究的热点。

目前，使用的间充质干细胞主要为骨髓间充质干细胞，其来源方便快捷，可是该来源间充质干细胞具有如下缺陷：1.在骨髓中含量低（约0.1～0.01‰），而且随着年龄增加，其扩增、分化能力和细胞数量出现明显下降趋势；2.存在伦理问题，来源受到限制；3.供者有不适感，不易接受；4.病毒感染机会大；5.异体移植的免疫排斥强。人胎盘绒毛膜间充质干细胞是一种能替代骨髓间充质干细胞, 并可弥补其缺陷的间充质干细胞。人胎盘绒毛膜间充质干细胞有如下优势：1.取材几乎不受限制。胎盘为“废弃”物，只要在正常分娩的健康产妇知情同意的基础上，都能够提供胎盘。供者无痛苦，污染机会少；2.胎盘绒毛膜间充质干细胞更加原始，免疫原性更低，获得的原代间充质干细胞数量大；3.不涉及社会、伦理及法律方向的更多争论。因此人胎盘绒毛膜间充质干细胞受到再生医学领域的广泛关注。

间充质干细胞是继造血干细胞之后，第二种用于临床治疗的干细胞，国外已经有7种间充质干细胞产品用于临床。我国在间充质干细胞的基础研究方面起步早，有些基础研究还处于国际领先水平，但是我国的临床转化水平不足，没有相关临床细胞产品。因此，必定激发我国科研人员和临床医师需要大量的间充质干细胞进行基础和临床转化应用研究；另一方面，间充质干细胞传代过程影响细胞质量，目前公认的最有效的细胞代数为P3～P8代间充质干细胞。如何体外简便地培养出大量原代间充质干细胞是间充质干细胞基础研究和转化应用的关键之一，也是间充质干细胞研究领域中的重要研究方向。本发明通过三次培养，提高了P0代细胞数量，为将来的研究提供材料保障，同时减少了同一研究中，使用不同批次细胞产生的差异。

因此建立一种简便的能获得大量P0代细胞的人胎盘绒毛膜间充质干细胞培养体系是亟需解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞培养体系，能够提高P0代细胞产量。

为实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞培养体系，其特征在于，包括以下步骤：

（1）人胎盘绒毛膜组织处理后，进行初次培养，7天后倒置显微镜下观察培养情况，更换培养基；

（2）初次培养瓶中的组织块、培养液和冲洗液离心后重新接种，进行再次培养，7天后倒置显微镜下观察培养情况，更换培养基；

（3）再次培养瓶中的组织块、培养液和冲洗液离心后重新接种，进行第三次培养，7天后倒置显微镜下观察培养情况，更换培养基；

（4）待三次培养细胞融合度达到80-90%时，用胰酶消化传代，即得人胎盘绒毛膜间充质干细胞。

根据权利要求1所述的一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞培养体系，其特征在于，所述步骤（1）所述7天是指培养瓶置于培养箱中处于完全静止状态，不移动、不用显微镜观察和不进行培养液更换。

根据权利要求1所述的一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞培养体系，其特征在于，所述步骤（1）所述更换培养基是指全量换液。

根据权利要求1所述的一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞培养体系，其特征在于，所述步骤（2）所述初次培养瓶中的组织块、培养液和冲洗液是指初次培养7天后，第一次换液时，培养瓶中的组织块和培养液，以及用生理盐水冲洗培养瓶底的冲洗液。

根据权利要求1所述的一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞培养体系，其特征在于，所述步骤（2）所述离心为1500 r/min，5min。

根据权利要求1所述的一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞培养体系，其特征在于，所述步骤（2）所述再次培养接种的培养瓶为初次培养接种培养瓶数量的一半。

根据权利要求1所述的一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞培养体系，其特征在于，所述步骤（2）所述7天是指培养瓶置于培养箱中处于完全静止状态，不移动、不用显微镜观察和不进行培养液更换。

根据权利要求1所述的一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞培养体系，其特征在于，所述步骤（2）所述更换培养基是指全量换液。