[发明专利]辣椒碱类化合物、其提取方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及用于核酸染色的新颖的辣椒碱类化合物、其提取方法及其应用。

背景技术

目前在分子生物学核酸电泳中主要是使用溴化乙啶(ethidium bromide，EB)作为染色液进行染色。溴化乙啶来自化学合成，是最常用的嵌入性荧光染料。活细胞或固定细胞均能从极稀溶液中摄取EB染料，DNA螺旋暂时弯曲允许EB荧光染料嵌入大分子疏水中心的碱基对之间。

已有国内外的生物公司生产大分子量核酸染料用于替代溴化乙锭(EB)，但是其市场价格极其昂贵，且采用化学合成，工艺复杂，成本高。

目前市场还没有植物提取物当作分子生物学核酸染料。

目前市场上已知的各种食用色素都具有较强的染色力，如辣椒红色素、番茄红色素、胡萝卜色素、姜黄素等等，但作为核酸染色剂的用途未见报道。

辣椒(又名：番椒、海椒、辣子、辣角、秦椒等，拉丁文名：Capsicum annuum L.)，是一种茄科辣椒属植物，为一年或有限多年生草本植物。果实通常成圆锥形或长圆形，未成熟时呈绿色，成熟后变成鲜红色、黄色或紫色，以红色最为常见。辣椒的果实因果皮含有辣椒素而有辣味。辣椒的成分相当复杂，但主要成分是辣椒碱和辣椒色素，以及具有特有香味的挥发物。通过将辣椒素与蛋白质、碳水化合物、脂肪、无机盐分离开来，获得一种浓缩物，其中辣椒碱可溶于乙醇、乙醚、苯及碱性水溶液中。辣椒中挥发物用水蒸馏与溶剂萃取收集后，在色质联用仪中进行分析，证明有醇、羟基化合物，吡嗪环状碳水化合物、树脂类等各种成分。

由于辣椒中辣椒碱和辣椒色素混合物中单成分极性非常接近，对分离技术提出很高的要求，因而迄今为止未见报道用于核酸染色的辣椒的单成分化合物。

发明内容

本发明提供一种从辣椒提取的天然产物，其是一种优质天然色素，用于核酸DNA的染色。

因此，本发明的一个目的在于提供式I的化合物：

本发明还提供一种制备所述的式I化合物的方法。

本发明所述的制备所述的式I化合物的方法包括以下步骤：

(1)提取：以干燥辣椒粉为原料，以乙醇作为浸取剂，室温静止浸取，得到浸取液；

(2)浓缩：在低于80℃的温度(或优选35-78℃)减压蒸发除去乙醇，得到浓缩物；

(3)萃取提纯：浓缩物溶于水中，过滤，除去浓缩物中的胶状的树脂类杂质，弃掉滤饼，用氯仿萃取滤液，然后蒸发除去萃取溶剂，得到较纯的提取物辣椒碱混合物；

(4)柱层析分离：采用柱层析法对步骤(3)所得的辣椒碱混合物进行分离，采用的洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂，收集含所述的式I化合物的洗脱液，浓缩后分离得到所述的式I化合物。

在一实施方式中，所述步骤(1)具体为：采用95％乙醇室温静止浸取干燥辣椒粉24-48小时，优选24小时，较优选36小时，更优选48小时。在一实施方式中，所述步骤(1)具体为：采用95％乙醇室温静止浸取干燥辣椒粉24-48小时。

在一实施方式中，所述步骤(2)中，在35-78℃减压蒸发乙醇。在一实施方式中，可以先在较低温度，例如在35℃-45℃，优选35℃(或36℃，37℃，38℃，39℃，40℃，41℃，42℃，43℃，44℃或45℃)减压蒸发一部分乙醇，然后升温至60℃-78℃(60℃，61℃，62℃，63℃，64℃，65℃，66℃，67℃，68℃，69℃，70℃，71℃，72℃，73℃，74℃，75℃，76℃，77℃，78℃，或79℃)减压蒸发残余乙醇。

在一实施方式中，所述步骤(3)中采用氯仿萃取滤液1-4次，或1-3次。

在一实施方式中，所述步骤(3)中浓缩物与水的重量比例为1:40-100，优选1：50-90，较优选1:50-80，最优选1:50。

在一实施方式中，所述步骤(4)中，以体积比为10：1的石油醚和乙酸乙酯洗脱剂混合物进行洗脱。

在一实施方式中，本发明所述的制备所述的式I化合物的方法包括以下工艺流程：

辣椒→干燥→粉碎→乙醇→浸取→浓缩→氯仿→提纯→辣椒碱类化合物。

在一实施方式中，本发明所述的制备所述的式I化合物的方法可以具体如下：

1、原料的准备：选用色红、味辣、水分低、无霉变的干辣椒加工成辣椒粉。或者选用市售的无霉变的干燥辣椒粉作为原料。

2、提取(或浸取)：采用常温静止浸取的方法进行提取。选用95％无毒、价廉、易得的食用酒精作为浸取剂，常温静止浸取24-48小时。