[发明专利]一种用于研究破骨细胞融合的荧光蛋白标记方法在审
| 申请号： | 201710442983.8 | 申请日： | 2017-06-13 |
| 公开（公告）号： | CN107236724A | 公开（公告）日： | 2017-10-10 |
| 发明（设计）人： | 叶玲;余钒源;吴凡子;汪成林;杨静 | 申请（专利权）人： | 四川大学 |
| 主分类号： | C12N15/06 | 分类号： | C12N15/06;C12N5/18;C12N5/10 |
| 代理公司： | 成都九鼎天元知识产权代理有限公司51214 | 代理人： | 易小艺 |
| 地址： | 610064 四川*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 研究 细胞融合 荧光 蛋白 标记 方法 | ||
1.一种用于研究破骨细胞融合的荧光蛋白标记方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）将含CTSK-Cre转基因的小鼠原代骨髓单核细胞和含RosamTmG的转基因小鼠原代骨髓单核细胞以3:1-1:3的比例混合培养；
（2）进行破骨分化向诱导；
（3）荧光显微镜观察。
2.根据权利要求1所述的一种用于研究破骨细胞融合的荧光蛋白标记方法，其特征在于：所述步骤（1）中混合培养前Cre重组酶能特异性识别loxp DNA 序列，使 loxP位点间的基因序列被删除，从而实现条件性基因打靶。
3.根据权利要求1或2所述的一种用于研究破骨细胞融合的荧光蛋白标记方法，其特征在于：所述步骤（1）中培养条件为：含10%FBS、1%P/S的DMEM培养基，37℃恒温孵箱，5%二氧化碳,95%氧气。
4.根据权利要求3所述的一种用于研究破骨细胞融合的荧光蛋白标记方法，其特征在于：所述培养条件中，混合后细胞总量达到以下要求：A、96孔板细胞总量为3000-8000，DMEM培养基体积为100ul；B、其他的孔板或者培养皿应根据其底面积与96孔板的底面积进行比例换算，得到最终的混合细胞量。
5.根据权利要求1所述的一种用于研究破骨细胞融合的荧光蛋白标记方法，其特征在于：所述步骤（2）中诱导过程：混合培养的第一天加入浓度为50ng/ml的MSCF，第三天全换液，培养基中加入50ng/mlMCSF+50ng/mlRANKL。
6.根据权利要求1所述的一种用于研究破骨细胞融合的荧光蛋白标记方法，其特征在于：所述步骤（1）中CTSK-Cre转基因的小鼠原代骨髓单核细胞和含RosamTmG的转基因小鼠原代骨髓单核细胞以1：1的比例混合培养。
7.根据权利要求1所述的一种用于研究破骨细胞融合的荧光蛋白标记方法，其特征在于：所述步骤（3）荧光显微镜观察中红色荧光采用tdTomato适用的检测参数，激发峰554nm，发射峰581nm；绿色荧光采用EGFP适用的检测参数，激发峰488nm，发射峰507nm。
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