[发明专利]一种固相萃取‑液相色谱串联质谱法同时测定水体中六类24种抗生素的方法

说明书

技术领域

本发明属于水环境中微量有机污染物质残留检测技术领域，涉及一种水中微量有机污染物的检测方法，特别涉及一种以固相萃取(SPE)前处理结合液相色谱串联质谱技术(HPLC-MS/MS)，能够高效、同时检测出水体中六类多达24种抗生素的分析检测方法。

技术背景

抗生素因其具有抗菌性能而被大量用于人类、动物的疾病治疗，促进农作物的生长和水产养殖业。全球范围内，每年抗生素使用情况约为200万吨，仅在中国每年就有25万吨。而这些抗生素只有少部分在生物体中，高达80％以上会通过尿液和粪便排泄进入自然环境中。抗生素在动物体内残留后有积累效应，达到一定量时会产生毒害作用，若长期摄入抗生素，药物在体内缓慢蓄积达到一定浓度时可导致急慢性中毒甚至是器官的病变。此外，抗生素可以直接杀死某些环境介质中的微生物或抑制微生物的生长，从而影响微生物群落结构和活性。同时，抗生素由水体进入土壤环境后可被植物吸收富集，通过食物链进入人体。因此，在准确测定水环境中抗生素含量的基础上，采取相应的控制措施已成为重中之重。

目前，有关水体环境中抗生素检测的分析方法已经引起了广泛关注，研究进展如下：中国专利公开号CN101639466A公开了一种针对水环境中磺胺类抗生素的 SPE-HPLC方法；中国专利公开号CN101696964A公开了一种测定水环境中氟喹诺酮的SPE-HPLC-荧光方法；中国专利公开号CN103336080A公开了一种同时检测水中四环素类的HLB-HPLC-MS/MS方法。中国专利公开号CN103344715A公开了一种采用液相色谱串联质谱法定量检测水中青霉素类抗生素的方法。中国专利公开号CN103278587A公开了一种针对水环境中三种头孢类抗生素的HLB-HPLC-MS 方法。中国专利公开号CN102269747A公开了一种一次性测定养殖场动物粪便、土壤、水体等环境样本中四环素类、氯霉素类和磺胺类共6种抗生素含量的方法。

但上述这些方法仍存在一些缺陷，由于实际环境中污染物的种类多、浓度较低，不同抗生素的理化性质和存在形态差异性较大，环境基质较为复杂，准确地测定环境中抗生素含量具有很大的挑战。之前多数研究仅针对几种或某一类抗生素的共检测，但环境中抗生素的种类繁多，人们对饮用水安全标准的要求日益提高，拥有高效、快速、准确富集净化和同步分析水环境中抗生素的技术是必不可少的。固相萃取(SPE)结合液相色谱-质谱法(HPLC-MS/MS)具有应用范围广、分离能力强、灵敏度高和分析速度快等特点，目前已成为有机物预处理和分析的重要方法之一。但现有的固相萃取结合液相色谱-质谱法用于水环境中抗生素的检测时，大多由于预处理不好，或固相萃取前处理条件、液相色谱条件和/或质谱条件选得不好，或多或少存在着检测结果不够准确、不稳定、干扰多、有机试剂消耗大、检测抗生素数量和范围有限等问题。

发明内容

本发明的目的旨在克服现有方法中存在的有机试剂消耗大、耗时久、干扰多以及检测抗生素数量和范围有限等问题，提供一种检测结果准确、稳定，干扰少，有机试剂用量少，检测过程耗时少，能同时测定水环境(饮用水、自来水、地表水、污水处理厂进出水)中六类(磺胺类、四环素类、氟喹诺酮类、大环内酯类、酰胺醇类和青霉素类)24种不同结构抗生素的方法，即一种固相萃取前处理技术结合液质联用测定水体中24种抗生素的方法。它通过对固相萃取前处理、液相色谱条件和质谱条件的优化，最终能够实现快速检测，适用对象广，测定结果准确，稳定，灵敏，干扰少，从而为水体中微量有机物的安全检测提供了一种新型可靠的方法。

本发明是通过以下技术方案来实现的：

一种固相萃取-液相色谱串联质谱法同时检测水体中六类24种抗生素的方法，即一种富集净化并同时检测水中磺胺类、四环素类、氟喹诺酮类、大环内酯类、酰胺醇类和青霉素类这六类24种抗生素的方法(24种抗生素分别为磺胺甲恶唑、磺胺嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲异恶唑、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、阿奇霉素、克拉霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、环丙沙星盐酸盐、氟罗沙星、氧氟沙星、恩诺沙星、盐酸土霉素、金霉素盐酸盐、阿莫西林三水合物、青霉素G甲盐、甲砜霉素、氟甲砜霉素、氯霉素、盐酸氯苯胍)，按以下步骤实施：

(1)水样的预处理

采集水样，水样过滤除去悬浮颗粒物，用酸调节pH至3.0-4.0；固相萃取前加入内标物指示回收率；