[发明专利]一种固相萃取‑液相色谱串联质谱法同时测定水体中六类24种抗生素的方法

权利要求书

1.一种固相萃取-液相色谱串联质谱法同时检测水体中六类24种抗生素的方法，其特征在于，按以下步骤进行：

(1)水样的预处理

水样过滤除去悬浮颗粒物，加酸调节水样pH至3.0-4.0，固相萃取前加入内标物指示回收率；

(2)固相萃取前处理，即富集净化过程

依次用甲醇和等体积的超纯水活化固相萃取小柱，将步骤(1)中处理过的水样过柱即富集，控制水样流速；富集完成后依次用超纯水和等体积的低浓度甲醇淋洗，并在真空下干燥固相萃取小柱；之后，再用甲醇洗脱，甲醇洗脱后用氮气吹干收集的洗脱液，得到残渣；将残渣用一定浓度的甲醇重新溶解，定容，经超声、过滤后转移至进样瓶中，待测；

(3)液相色谱串联质谱法测定水环境中六类24种抗生素的含量

采用内标法，在液相色谱-串联质谱仪上，定量检测水样中六类24种抗生素的含量；所述的六类24种抗生素是指磺胺类、四环素类、氟喹诺酮类、大环内酯类、酰胺醇类和青霉素类这六类的24种抗生素；24种抗生素分别为磺胺甲恶唑、磺胺嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲异恶唑、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、阿奇霉素、克拉霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、环丙沙星盐酸盐、氟罗沙星、氧氟沙星、恩诺沙星、盐酸土霉素、金霉素盐酸盐、阿莫西林三水合物、青霉素G甲盐、甲砜霉素、氟甲砜霉素、氯霉素、盐酸氯苯胍。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，固相萃取前分别加入50ng/L的¹³C₁D₃-红霉素、D₅-诺氟沙星、¹³C₆-磺胺甲恶唑这三种内标物指示回收率。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述三种内标物分别用HPLC级甲醇稀释为5mg/L；固相萃取前分别加入10μL，5mg/L的¹³C₁D₃-红霉素、D₅-诺氟沙星、¹³C₆-磺胺甲恶唑这三种内标物。

4.根据权利要求1、2或3所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，水样过滤所用的过滤膜是孔径为0.45μm或0.47μm的Whatman GF/F系列玻璃纤维滤膜；加酸调节水样pH，是指加入体积浓度为10％的稀硫酸调节水样pH。

5.根据权利要求1、2或3所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述的固相萃取小柱为Waters公司Oasis HLB小柱，是用于酸性、中性和碱性化合物的通用型吸附剂；步骤(2)中，过柱时水样流速控制在1-4mL/min；洗脱HLB固相萃取柱的洗脱液流速小于1.0mL/min。

6.根据权利要求1、2或3所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，淋洗所用的低浓度甲醇为体积浓度小于10％的甲醇-水溶液；洗脱所用的甲醇为HPLC级甲醇；定容残渣所用的甲醇是体积浓度为70％的甲醇-水溶液；用甲醇定容后，超声5-15min，再用针式滤器过滤；针式滤器选用孔径小于0.22μm的聚四氟乙烯针式滤头。

7.根据权利要求1、2或3所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，采用Waters Xevo TQ-Smicro型液相色谱-串联质谱仪定量检测水样中抗生素的浓度。

8.根据权利要求1、2或3所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，液相色谱的检测条件为：色谱柱为C18液相色谱柱2.1mm×50mm×5μm，柱温35℃；采取梯度洗脱程序：流动相A即有机相为乙腈，流动相B即水相为含有0.5％甲酸的超纯水溶液；初始流动相中有机相比例为20％，1.5min前一直保持此比例；到4min时有机相升至95％，并维持此比例2min；后迅速回到初始比例，总的流动相时间即洗脱总时间为10min，进样体积为5μL；流速为0.25mL/min。

9.根据权利要求1、2或3所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，质谱的检测条件为：离子源为电喷雾离子化源ESI+；扫描方式：多反应离子检测MRM；锥孔电压范围为10-30V，碰撞能范围为13-40eV。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，质谱的检测条件为：源温度为150℃，锥孔电压：30V，毛细管电压为3.5kV，脱溶剂气温度：500℃，脱溶剂气流速为1000L/h，扫描时间：0.1s。