[发明专利]小球藻的丙环唑抗性突变体

说明书

本申请是2016年6月2日提交的申请号为201621019072的印度申请的分案申请，其中的全部内容通过引用的方式并入本申请中。

技术领域

本发明涉及小球藻(Chlorella species)的丙环唑抗性突变体(propiconazole resistant mutants)。

背景技术

定义

正如本发明所使用的，除非在文中另有所指，否则以下术语通常旨在具有如下所述的含义。

草食性动物：术语“草食性动物”是指水生害虫，如轮虫类(rotifers)、腰鞭毛虫类(dinoflagellates)、纤毛虫类(ciliates)，原生动物以及真菌，其降低了藻类生物量/生产的产量。

污染生物体：术语“污染生物体”是指在利用资源的同时与藻类竞争并随后导致藻类生物量减少的丝状单细胞蓝藻细菌(cyanobacteria)、鞭毛虫类(flagellates)、硅藻类(diatoms)等。

藻类：术语“藻类”是指一个大型、多样化的真核生物群体的非正式术语，真核生物不一定密切相关，因此是多样性的。所包括的生物体范围从单细胞属(如小球藻)到多细胞形态(如巨藻，一种长达50米长的大型褐藻)。

丙环唑：丙环唑是一种三唑杀真菌剂，也被称为DMI，或脱甲基化抑制杀真菌剂，由于与14-α脱甲基酶的结合以及抑制14-α脱甲基酶将前体脱甲基为麦角固醇。没有该脱甲基化步骤，麦角固醇不被并入生长的真菌细胞膜中，并停止细胞生长。

背景技术

以非常低的成本获得大量藻类生物量的主要挑战是获得藻类的连续稳定的生产。为了达到这个目的，藻类必须在开放式池塘中以足够高的密度在近一年内稳定地培养。然而，在开放式池塘培养的藻类容易受到非生物和生物胁迫，导致频繁的培养冲突和生产力损失。在很大程度上可以通过生物勘探、筛选和为特定地理位置和季节选择正确种类的藻类菌株来提防非生物胁迫。管理开放式池塘中的污染物，同时为保证生物燃料成功生产所需的藻类的高生产力是非常困难的。

草食性动物和污染生物体是藻类培养中的主要问题。纤毛虫类、腰鞭毛虫类、轮虫类、硅藻类、丝状单细胞蓝藻细菌、鞭毛虫类等与藻类喂养或竞争营养物质，导致藻类生物量减少。已知各种化学物质，其可以用于杀死草食性动物和污染生物体，然而，这些化学物质对藻类生长也具有有害影响。

因此，感到需要大规模生产藻类，以减轻上述缺点。

发明内容

发明目的

此处的至少一种实施方案满足的本发明的一些目的如下：

本发明的一个目的是改善现有技术中的一个或多个问题或至少提供一种有用的替代方案。

本发明的一个目的是提供小球藻(Chlorella sp.)的丙环唑抗性突变体。

本发明的另一个目的是提供一种用于制备小球藻的丙环唑抗性突变体的方法。

本发明的另一个目的是提供使用丙环唑抗性选择而呈现增强的作物保护、增加的生物量以及抗非生物胁迫的小球藻的丙环唑抗性突变体。

本发明的另一个目的是提供一种使用小球藻的丙环唑抗性突变体通过控制水生环境中的草食性动物和污染生物体来选择性地提高小球藻的产量的方法。

本发明的其它目的和优点将在以下描述中更加明显，但以下的描述并不意味着限制本发明的范围。

发明内容

本发明涉及小球藻的丙环唑抗性突变体。一方面，小球藻的丙环唑抗性突变体具有藻类和原生动物保藏中心(The Culture Collection of Algae and Protozoa，CCAP)保藏号CCAP 211/134的特征。该小球藻的丙环唑抗性突变体对丙环唑具有增加的耐受性，在37℃下没有呈现减少的生物量产率。相对于使用小球藻的丙环唑抗性突变体后的生物量产率来确定耐受性的增加。

具有保藏号CCAP 211/134的小球藻的丙环唑抗性突变体通过以下方式制备：对小球藻细胞进行UV辐射，复原经UV处理的小球藻培养物，并用预先确定浓度的丙环唑处理复原的经UV处理的小球藻培养物，以获得小球藻的丙环唑抗性突变体的藻种(strains)。然后将藻种分离，并将各藻种在培养基中分别培养，以鉴定并获得呈现出生物量产率的藻种。使以此得到藻种置于在至少37℃的温度胁迫下，以鉴定并获得具有保藏号CCAP 211/134的小球藻的丙环唑抗性突变体，其在37℃下没有呈现减少的生物量产率。