[发明专利]Anti AFP CAR-T细胞及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种Anti AFP CAR-T细胞，其特征在于，所述Anti AFP CAR-T细胞在T细胞内表达SCFV–IgD–CD28–OX40–CD3ζ融合蛋白；

所述SCFV–IgD–CD28–OX40–CD3ζ融合蛋白中，所述SCFV用于结合所述AFP蛋白，并且所述SCFV的氨基酸序列为第一序列，所述第一序列为：

EVQLVQSGAEVKKPGESLTISCKASGYSFPNYWITWVRQMSGGGLEWMGRIDPGDSYYTTYNPSFQGHVTISIDKSTNTAYLHWNSLAASDTAMYYCARYYVSLVDIWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQSVLTQPAKVSGSPGQKITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVNNRPSEVSNRFSGAKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTTGSRSVFGGGTKLTVLG；

所述SCFV–IgD–CD28–OX40–CD3ζ融合蛋白中，所述IgD的氨基酸序列为第二序列，所述CD28的氨基酸序列为第三序列，所述OX40的氨基酸序列为第四序列；所述CD3ζ的氨基酸序列为第五序列；

所述第二序列为：

TFTCFVVGSDLKDAHLTWEVAGKVPTGGVEEGLLERHSNGSQSQHSRLTLPRSLWNAGTSVTCTLAHPSLPPQRLMALREPAAQAPVKLSTNLLASSDPPEAA；

所述第三序列为：

FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSALLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS；

所述第四序列为：

RRDQRLPPDSHKPPGGGSFRTPIQEEQADAHSTLAKI；

所述第五序列为：

RVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRSEEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR。

2.根据权利要求1所述的Anti AFP CAR-T细胞，其特征在于，所述SCFV–IgD–CD28–OX40–CD3ζ融合蛋白中，

所述SCFV–IgD–CD28–OX40–CD3ζ的氨基酸序列为第六序列，所述第六序列为：

EVQLVQSGAEVKKPGESLTISCKASGYSFPNYWITWVRQMSGGGLEWMGRIDPGDSYTTYNPSFQGHVTISIDKSTNTAYLHWNSLKASDTAMYYCARYYVSLVDIWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQSVLTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSKVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVNNRPSEVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYKSSYTTGSRAVFGGGTKLTVLGTFTCFVVGSDLKDAHLTWEVAGKVPTGGVEEGLLERHSNGSQSQHSRLTLPRALWNAGTSVTCTLNHPSLPPQRLMALREPAAQAPVKLSLNLLASSDPPEAAFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRRDQRLPPDAHKPPGGGSFRTPIQEEQADAHSTLAKIRVKFSRSAEPPAKQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR。

3.根据权利要求1-2任一所述的Anti AFP CAR-T细胞，其特征在于，所述Anti AFPCAR-T细胞通过慢病毒感染T淋巴细胞获得，所述慢病毒通过携带有所述SCFV–IgD–CD28–OX40–CD3ζ融合蛋白的慢病毒表达载体感染293T细胞得到。