[发明专利]一种造血干细胞培养基

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种造血干细胞培养基。

背景技术

造血干细胞是血液系统中的成体干细胞，是一个异质性的群体，具有长期自我更新的能力和分化成各类成熟血细胞的潜能。它是研究历史最长且最为深入的一类成体干细胞，对研究各类干细胞，包括肿瘤干细胞，具有重要指导意义。由于造血干细胞具有多向分化的潜能，将造血干细胞移植到体内是治疗白血病、淋巴瘤等恶性肿瘤、代谢性疾病、自身免疫性疾病及先天免疫缺陷等严重危害人类健康疾病的有效方法，可以有效的减轻患者的痛苦。但是，由于造血干细胞在体内的数量极少，大大的限制了造血干细胞在临床中的应用。

骨髓、外周血和脐血是造血干细胞的重要来源。与骨髓和外周血造血干细胞相比，脐带血造血干细胞更为原始，自我增殖能力最强，且脐带血具有富含更早期的造血干细胞、采集方便，造血干细胞免疫原性弱、对异源性抗原产生的抗体少、移植过程中不需要严格配型、成熟性T 细胞较少、采集和保存容易、无肿瘤细胞污染、对供者无损伤及副作用、CD34⁺CD38- 与CD34+CD33- 的比例较高等优点，因而脐带血造血干细胞具有极大的临床应用价值。但是，单份脐血的造血干细胞含量低，在临床中很难用于正常体重成人患者的移植。因此，造血干细胞在移植前需要进行体外扩增。

目前，造血干细胞的体外增殖途径主要有两种，一种是通过基质的灌注进行体外培养，但是，基质含有各种细胞和各种蛋白成分，成分复杂且不明确，对后期造血干细胞的分离造成较大难度，且成本较高，大大限制了在造血干细胞体外扩增的应用；第二种是将造血干细胞接种于造血干细胞培养基进行体外培养。然而，采用现有造血干细胞培养基培养的造血干细胞大多存在活性和增殖能力较差的问题，且造血干细胞易分化。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的上述不足，提供一种造血干细胞培养基，采用该培养基可显著提高造血干细胞的扩增率和细胞活性，使造血干细胞能长久处于增殖不分化状态，保持其干细胞特性。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

本发明提供一种造血干细胞培养基，所述造血干细胞培养基包括基础培养基和添加于基础培养基中的添加剂，按终浓度计，所述添加剂包括以下含量的组分：FBS 100-200mg/mL、亚硒酸钠0.02-0.03μmol/mL、卡介菌多糖核酸5-10mg/mL、千金藤素50-100μmol/mL、海藻糖50-100ng/mL、维生素 C40-80ng/mL、第一细胞因子缓释微囊1.5-2.5mg / mL、第二细胞因子缓释微囊25-50mg/mL。

本发明将千金藤素添加到造血干细胞培养基中，和卡介菌多糖核酸相合，相对于普通培养基，其能够显著提高造血干细胞增殖率，使造血干细胞具有干性强、活性高的特点；维生素C和海藻糖不仅能够具有抗氧化作用，而且能够降低造血干细胞的氧分压，使造血干细胞在增殖的过程中处于低氧环境中，有利于造血干细胞的增殖。

优选地，所述第一细胞因子缓释微囊的制备方法包括以下步骤：

A、将IL-3、IL-6、GM-CSF、聚乙二醇加入预先添加有甘露醇和硫酸锌的水溶液中，搅拌均匀后，得到混合物A，所述混合物A中IL-3、IL-6、GM-CSF的浓度均为1-2wt％，聚乙二醇的浓度为6-10 wt％；

B、将聚羟基乙酸- 聚乳酸- 聚乙二醇加入二氯甲烷中溶解，搅拌均匀后，得到混合物B， 所述混合物B中聚羟基乙酸- 聚乳酸- 聚乙二醇的浓度为12-18wt％；

C、将混合物A 加入到混合物B 中，搅拌均匀后，得到混合物C，所述混合物A和混合物B的体积比为1:1-2；

D、将聚乙烯醇、壳聚糖和氯化钠加入水中，搅拌均匀后，得到混合物D；所述混合物D中聚乙烯醇的浓度为1-2 wt %，壳聚糖的浓度为0.5-1 wt %，氯化钠的浓度为1-2 wt %；

E、将混合物C加入混合物D中，搅拌进行溶剂挥发，经洗涤、离心分离、真空冷冻干燥，制得第一细胞因子缓释微囊。

优选地，所述第一细胞因子缓释微囊的粒径为50-90μm。

优选地，所述聚乙烯醇由质量比为1:0.5-2的无规聚乙烯醇和间规聚乙烯组成。

优选地，所述无规聚乙烯醇的聚合度为600-1000，所述间规聚乙烯的聚合度为1800-2500。

优选地，所述混合物A中，甘露醇的浓度为2-4 wt％，碳酸锌的浓度为1-3 wt％。

优选地，所述第二细胞因子缓释微囊的制备方法包括以下步骤：