[发明专利]一种马链球菌兽疫亚种保护性抗原MAP及其制备方法

权利要求书

1.一种马链球菌兽疫亚种保护性抗原MAP，其特征在于：为SEZ MAP重组蛋白，由map基因编码，由807个氨基酸残基组成，分子量为87.02kDa，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.一种链球菌保护性抗原MAP的制备方法，包含以下步骤：

S1、PCR扩增：使用马链球菌兽疫亚种基因组为模板，使用引物进行PCR扩增克隆map基因；

S2、与载体连接：PCR产物和pET-32a载体通过限制性酶酶切后连接；

S3、转化和诱导：将上述连接好的载体转化大肠杆菌后，待其OD为0.6～0.8时，加入终浓度0.4～1.0mmol/L IPTG后诱导3-5h；

S4、纯化：离心收集细菌沉淀并重悬，破碎后离心收集上清液，取上清液进行纯化，获得纯化的重组蛋白。

3.根据权利要求2所述的链球菌保护性抗原MAP的制备方法，其特征在于：所述引物为：

正向引物：5’-CCCGGATCCGGTCAAGCGCATTTCTGAT-3’；

反向引物：5’-CTCAAGCTTTGAGGCAACCTTGGAGA-3’。

4.根据权利要求3所述的马链球菌兽疫亚种保护性抗原MAP的制备方法，其特征在于：所述正向引物和反向引物各有1个酶切位点，分别为BamHI酶切位点和Hind III酶切位点。

5.权利要求1所述马链球菌兽疫亚种保护性抗原MAP在制备马链球菌兽疫亚种疫苗中的应用。

6.权利要求1所述马链球菌兽疫亚种保护性抗原MAP制备马链球菌兽疫亚种疫苗的方法，其特征在于：将成功表达并纯化的SEZ MAP重组蛋白与免疫佐剂乳化后作为疫苗，SEZ MAP重组蛋白浓度为100-200μg/mL。