[发明专利]一种齐考诺肽的合成方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种齐考诺肽的合成方法。

背景技术

2004年12月28日,FDA批准Elan公司的齐考诺肽注射液(ziconotide，Prialt) 上市，用于鞘内注射治疗，主要适用于其他治疗方法不能耐受或不能控制的严重慢性疼痛患者。欧盟于2005年2月22亦进行了相同的批准。2007年，联合镇痛会议专门小组推荐齐考诺肽作为一线鞘内镇痛药。

齐考诺肽是一种强效的、选择性的N型电压敏感性钙通道阻滞剂，它包含的3个二硫键形成了一个完整的、结构稳定的不均匀的环，使得齐考诺肽可以特异性地、选择性地、可逆地抑制脊髓背角上I、Ⅱ层的、与疼痛传递有关的A δ、C神经纤维末梢的N一型电压敏感性钙通道，可阻止脊髓初级疼痛传入神经元上钙离子的涌入，抑制神经递质如P物质、降钙素基因相关肽以及谷氨酸等的释放，从而阻止或降低疼痛信号的传导。齐考诺肽还作用于大脑皮层、神经垂体和脊髓中的钙通道上，但不作用于神经肌肉接点处的钙通道。此外，齐考诺肽不与阿片受体、胆碱能受体、单胺类受体或肽能受体结合。生物体外研究表明，齐考诺肽能够部分地但却有效地阻断去甲肾上腺素的释放，而不影响γ-氨基丁酸或谷氨酸的释放，也不阻断烟碱样乙酰胆碱受体离子通道。在小鼠模型试验中，齐考诺肽具有可逆的，剂量相关的镇痛效果。当将齐考诺肽直接应用于鼠神经受损的部位时，可引起热痛觉过敏和机械性异常性疼痛，而对正常神经无此反应。

在药理学方面，齐考诺肽和阿片类镇痛剂的进一步区别在于阿片类作用的多种模式，而齐考诺肽具有高选择性作用。因此，齐考诺肽新的药理学特征的潜能来自其3个特性：在阿片类无效的病例中有效；即使在有阿片类耐受性的病人中，与阿片类镇痛剂联合使用时也有辅助的镇痛效果；齐考诺肽不会引起耐受性。因此，齐考诺肽在疼痛治疗中具有独特的地位。

调查结果显示，至少40％～50％的慢性疼痛(持续3个多月或以上)病人缺乏治疗。2004年，美国人在止痛药物上的支出为180亿美元。

齐考诺肽是25个氨基酸组成的聚合阳离子肽(polycationicpeptide)，含有的碱性氨基酸包括4个赖氨酸和2个精氨酸；等电点pI是11.215，相对分子质量是2639.1，其化学结构如下式所示：

目前对齐考诺肽合成工艺报道的有以下路线：

在US2007269528、US2006234939、LU91181专利中，主要是其药理和治疗方面的报道，其中所述的齐考诺为纯液相合成所得。国内报道的工艺均为固相合成主链再采用不同方式进行成环。

在专利CN102268082中，虽然采用Cys(Trt)、Cys(Acm)、Cys(tBu)三种不同保护基，但在形成二硫键时采用一次性形成二对二硫键的方式，成键准确率低，而且采用了两次高浓度的三氟乙酸进行裂解，三氟乙酸消耗大，不仅成本高，而且对环境污染也大。

在专利CN101709082中，成环的六个Cys全部采用Acm为保护基，线性肽在含铊的试剂中脱除Acm保护基，最后在液相中自由成环。该法不仅用到重金属铊，而且同时形成三对二硫键，成环准确率低，后期纯化困难。

在专利CN101412752A中，采用Cys(Trt)、Cys(Acm)、Cys(Mob)三组保护基合成肽链，虽然是依次进行三对二硫键的环化，但其路线采用在固相上完成前两对二硫键的氧化，由于肽链一端固定在载体上，由于肽链自由旋转空间受限，第二对二硫键成环难度大，收率低。而且还要使用强腐蚀的超强酸三氟甲磺酸，操作危险大。

在CN104974237A中，采用片断法先合成四个片断，然后再将片断依次偶联，最后得齐考诺肽线性肽，最后自主成环得齐考诺肽。该法采用片断缩合方式，因片段间反应为液相条件，过程中的副产物除去困难，操作步骤繁琐且其成环方式为三对二硫键同时成环，二硫键之间成环准确度低。

在CN103304655A中，采用Lys-Gly、Thr-Gly、Ser-Gly三个二肽代替单个氨基酸偶联，与专利CN101709082B一样存在成环无选择性的问题。

在文献《固相法氧化选择性合成齐考诺肽》中，采用四个Trt保护基与2个 Acm保护基合成线性肽，一步自主选择形成两对二硫键。此法采用自主配对成环氧化，二硫键定位差。

齐考诺肽报道的合成方法有固相和液相合成方法，但是各方法都有方法本身的不足，因此需要一种与上述方法相比具有较大的改进的合成方法。

发明内容