[发明专利]一种齐考诺肽的合成方法

权利要求书

1.一种齐考诺肽的合成方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

(1)以Fmoc氨基型树脂为固相载体，按照肽序从C端到N端依次偶联所需的25个保护氨基酸，得到线性肽树脂；

(2)将步骤(1)得到的线性肽树脂选择性脱除Mmt，随后在树脂上氧化形成第一对二硫键得一环肽树脂；

(3)将步骤(2)所得一环肽树脂进行裂解，得脱除有Acm保护基的一环肽，然后在液相中氧化形成第二对二硫键得二环肽；

(4)将步骤(3)得的二环肽在脱除Acm保护基的同时形成第三对二硫键，经纯化、冻干得齐考诺肽。

2.如权利要求1所述的一种齐考诺肽的合成方法，其特征在于，三组Cys形成二硫键，形成二硫键的三组Cys中，同组的Cys同时连接Mmt、Trt、Acm三种保护基中的一种，且不同组的Cys所连接保护基互不相同。

3.如权利要求1所述的一种齐考诺肽的合成方法，其特征在于，步骤(1)中所述的Fmoc氨基型树脂包括但不仅限于Rink Amide树脂、Rink Amide MBHA树脂、Rink Amide AM树脂、Rink Amide BHA树脂、或Sieber树脂。

4.如权利要求1所述的一种齐考诺肽的合成方法，其特征在于，步骤(1)中所述的保护氨基酸分别为：Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Cys(Acm)-OH、Fmoc-Cys(Mmt)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH。

5.如权利要求1所述的一种齐考诺肽的合成方法，其特征在于，步骤(1)中缩合使用肽链偶联缩合剂体系，所述的肽链偶联缩合剂体系采用DIC/A、HBTU/A/B或HATU/C/B体系。

6.如权利要求5述的一种齐考诺肽的合成方法，其特征在于，所述A为HOBt或6-Cl-HOBt，B为DIPEA或TMP，C为HOAt。

7.权利要求1所述的一种齐考诺肽的合成方法，其特征在于，步骤(2)中所述的脱除Cys(Mmt)上的Mmt保护基的条件为含0.1-3％TFA的二氯甲烷溶液；氧化第一对二硫键的条件为在固相载体上用DMF、DCM、NMP中任一种或任两种的混合试剂或上述三种的混合试剂做溶剂，加入Et3N调节pH值为7.5-9.0，搅拌下通入空气进行氧化成环。

8.权利要求1所述的一种齐考诺肽的合成方法，其特征在于，步骤(3)中所述的裂解条件为三氟乙酸与清除剂的混合试剂，其中三氟乙酸的比例不低于85％；裂解粗肽经醚沉淀、离心后溶解在甲醇溶液中，加入Et3N调节pH值为7.5-9，搅拌下通入空气进行氧化形成第二对二硫键得二环肽。

9.权利要求1所述的一种齐考诺肽的合成方法，其特征在于，所述清除剂为水、苯甲醚或硫代苯甲醚。

10.权利要求1所述的一种齐考诺肽的合成方法，其特征在于，步骤(4)中所述形成第三对二硫键条件为向步骤(3)所得液体中加入碘单质，在15-30℃条件下搅拌环化形成第三对二硫键，再用抗坏血酸除去多余的碘，溶液经纯化、冻干得齐考诺肽。