[发明专利]一种紫草素手性异构体的分离检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及中草药检测技术领域，尤其涉及一种紫草素手性异构体的分离检测方法。

背景技术

紫草素是一种结晶性粉末，存在于紫草科植物紫草的根，新疆紫草等植物中。亦可用紫草的细胞培养生产紫草素。紫草素具有抗癌、抗炎、抗菌等作用，临床用于治疗急、慢性肝炎、肝硬化等，皮肝科用于治疗扁平疣、银屑病，局部应用治疗烧伤和促进伤口愈合，滴眼剂用于治疗单疱病毒性角膜炎，对上皮型树枝状和浅实质层树枝状角膜炎有一定疗效，油剂用于治疗婴儿皮炎、湿疹、阴道炎、子宫颈炎等；且含有紫草素的牙膏可防治牙龋和牙龈炎，亦可用于药物、化妆品及食品的着色剂等。

紫草素包括左旋紫草素和右旋紫草素，天然提取的紫草素一般为2种异构体的混合物，有些植物来源中左旋紫草素占优势，有些来源中右旋紫草素占优势。因此在实际的紫草素的应用研究过程中，如何对紫草素中这两种异构体进行分离检测从而进行不同结构的应用研究或作为其他产品合成原料的研究时显得极为重要。

发明内容

发明目的：为了克服现有技术中存在的问题，本发明提出了一种操作简单方便、具有良好的精密度、重现性和稳定性，数据直观可靠的紫草素手性异构体的分离检测方法。

技术方案：为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案为：一种紫草素手性异构体的分离检测方法，采用高效液相色谱的方法进行检测，具体包括如下步骤：

(1)对照品溶液的配制：精密称取紫草素对照品，用乙腈溶液进行溶解，配制成浓度为0.9-1.2mg/mL的对照品溶液；

(2)供试品溶液的配制：精密称取待测紫草素样品，加入乙腈溶液配制成浓度为0.9-1.1mg/mL的供试品溶液，超声溶解，放置至室温，摇匀，即得；

(3)液相色谱条件及系统适应性试验：手性柱(4.6mm×250mm，5μm)；以乙腈溶液为流动相A，以0.5％的冰醋酸溶液为流动相B，梯度洗脱；室温，柱温为30℃，流速0.8-1.0mL/min，进样量20μL；检测波长为512-520nm；其中流动相梯度为：

在0-5min段，乙腈的体积比例为60％-65％，冰醋酸溶液体积比例为35％-40％；

在5至15min段，乙腈的体积比例为65％-80％，冰醋酸溶液体积比例为20％-35％；

在15至30min段，乙腈的体积比例为80％-90％，冰醋酸溶液体积比例为10％-20％；

(4)测定法：将按照步骤(1)和(2)制得的对照品溶液和供试品溶液在步骤(3)的色谱检测条件下注入高效液相色谱仪进行检测，记录色谱图，然后计算紫草素样品中异构体的含量。

更为优选的，步骤(1)中所述对照品溶液浓度为1mg/mL。

更为优选的，步骤(2)中所述供试品溶液浓度为1mg/mL。

更为优选的，步骤(3)中所述流速为1.0mL/min。

更为优选的，步骤(3)中所述检测波长为516nm。

更为优选的，步骤(1)中所述流动相梯度为：

在0-5min段，乙腈的体积比例为63％，冰醋酸溶液体积比例为37％；

在5至15min段，乙腈的体积比例为75％，冰醋酸溶液体积比为25％；

在15至30min段，乙腈的体积比例为85％，冰醋酸溶液体积比为15％。

更为优选的，步骤(4)中的计算紫草素样品中异构体的含量具体方法为以对照品同保留时间上出现相同的峰，计算左旋紫草素和右旋紫草素分别的含量，计算公式为：C_样＝(C_对*A_样)/A_对，异构体含量＝C_样*V/M_样；

计算样品中左旋紫草素含量时，C_样表示紫草素样品中左旋紫草素的浓度；C_对表示对照品溶液的浓度；A_样表示紫草素样品中左旋紫草素相应的峰面积；A_对表示对照品溶液中跟左旋紫草素相同的峰的峰面积；V为供试品配制时的溶液体积；M_样表示供试品的质量；

计算样品中右旋紫草素含量时，C_样表示紫草素样品中右旋紫草素的浓度；C_对表示对照品溶液的浓度；A_样表示紫草素样品中右旋紫草素相应的峰面积；A_对表示对照品溶液中跟右旋紫草素相同的峰的峰面积；V为供试品配制时的溶液体积；M_样表示供试品的质量。