[发明专利]一种紫草素手性异构体的分离检测方法

权利要求书

1.一种紫草素手性异构体的分离检测方法，其特征在于采用高效液相色谱的方法进行检测，具体包括如下步骤：

(1)对照品溶液的配制：精密称取紫草素对照品，用乙腈溶液进行溶解，配制成浓度为0.9-1.2mg/mL的对照品溶液；

(2)供试品溶液的配制：精密称取待测紫草素样品，加入乙腈溶液配制成浓度为0.9-1.1mg/mL的供试品溶液，超声溶解，放置至室温，摇匀，即得；

(3)液相色谱条件及系统适应性试验：手性柱(4.6mm×250mm，5μm)；以乙腈溶液为流动相A，以0.5％的冰醋酸溶液为流动相B，梯度洗脱；室温，柱温为30℃，流速0.8-1.0mL/min，进样量20μL；检测波长为512-520nm；其中流动相梯度为：

在0-5min段，乙腈的体积比例为60％-65％，冰醋酸溶液体积比例为35％-40％；

在5至15min段，乙腈的体积比例为65％-80％，冰醋酸溶液体积比例为20％-35％；

在15至30min段，乙腈的体积比例为80％-90％，冰醋酸溶液体积比例为10％-20％；

(4)测定法：将按照步骤(1)和(2)制得的对照品溶液和供试品溶液在步骤(3)的色谱检测条件下注入高效液相色谱仪进行检测，记录色谱图，然后计算紫草素样品中异构体的含量。

2.根据权利要求1所述的紫草素手性异构体的分离检测方法，其特征在于：步骤(1)中所述对照品溶液浓度为1mg/mL。

3.根据权利要求1所述的紫草素手性异构体的分离检测方法，其特征在于：步骤(2)中所述供试品溶液浓度为1mg/mL。

4.根据权利要求1所述的紫草素手性异构体的分离检测方法，其特征在于：步骤(3)中所述流速为1.0mL/min。

5.根据权利要求1所述的紫草素手性异构体的分离检测方法，其特征在于：步骤(3)中所述检测波长为516nm。

6.根据权利要求1所述的紫草素手性异构体的分离检测方法，其特征在于：步骤(1)中所述流动相梯度为：

在0-5min段，乙腈的体积比例为63％，冰醋酸溶液体积比例为37％；

在5至15min段，乙腈的体积比例为75％，冰醋酸溶液体积比为25％；

在15至30min段，乙腈的体积比例为85％，冰醋酸溶液体积比为15％。

7.根据权利要求1所述的紫草素手性异构体的分离检测方法，其特征在于：步骤(4)中的计算紫草素样品中异构体的含量具体方法为以对照品同保留时间上出现相同的峰，计算左旋紫草素和右旋紫草素分别的含量，计算公式为：C_样＝(C_对*A_样)/A_对，异构体含量＝C_样*V/M_样；

计算样品中左旋紫草素含量时，C_样表示紫草素样品中左旋紫草素的浓度；C_对表示对照品溶液的浓度；A_样表示紫草素样品中左旋紫草素相应的峰面积；A_对表示对照品溶液中跟左旋紫草素相同的峰的峰面积；V为供试品配制时的溶液体积；M_样表示供试品的质量；

计算样品中右旋紫草素含量时，C_样表示紫草素样品中右旋紫草素的浓度；C_对表示对照品溶液的浓度；A_样表示紫草素样品中右旋紫草素相应的峰面积；A_对表示对照品溶液中跟右旋紫草素相同的峰的峰面积；V为供试品配制时的溶液体积；M_样表示供试品的质量。