[发明专利]一种细胞内构筑温度响应性聚集体的材料及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种细胞内构筑温度响应性聚集体的材料，其特征在于，所述材料包括响应性多肽和穿膜肽组成的多肽序列以及温敏聚合物，所述多肽序列的响应性多肽连接在温敏聚合物上；

所述响应性多肽为谷胱甘肽响应性多肽、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3响应性多肽、半胱氨酸蛋白酶Atg4响应性多肽、基质金属蛋白酶响应性多肽或磷酸酶响应性多肽；

所述谷胱甘肽响应性多肽为Cys-Lys-(S-S)-Asp；

所述半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3响应性多肽为Cys-Lys-Asp-Glu-Val-Asp；

所述半胱氨酸蛋白酶Atg4响应性多肽为Cys-Lys-Thr-Phe-Gly-Phe；

所述基质金属蛋白酶响应性多肽为Cys-Lys-Gly-Pro-Leu-Gly-Val-Arg-Gly-Lys或Cys-Lys-Pro-Leu-Gly-Leu-Ala-Gly；

所述磷酸酶响应性多肽为Cys-Lys-Leu-Val-Phe-Tyr(HPO₃)或Cys-Lys-Leu-Val-Phe-Tyr(HPO₃)-Lys-Leu-Val-Phe-Tyr(HPO₃)；

所述穿膜肽为GRKKRRQRRRPQ、RQIKWFQNRRMKWKK、YGRKKRRQRRR、RGGRLSYSRRRFSTSTGR、RRLSYSRRRF、PIRRRKKLRRLK、RRQRRTSKLMKR、RRRRNRTRRNRRRVR、KMTRAQRRAAARRNRWTAR、TRRQRTRRARRNR、RRRRRRRR或GRRRRRRRRRPPQ中的任意一种；

所述温敏聚合物为聚N-异丙基丙烯酰胺；

所述聚N-异丙基丙烯酰胺采用如下方法进行制备：

称取39.6mmol的N-异丙基丙烯酰胺、0.4mmol的N-(2-羟乙基)丙烯酰胺、0.1mmol的2-(十二烷基三硫代碳酸酯基)-2-甲基丙酸和0.02mmol的偶氮二异丁腈，并溶解在5mL的N，N'-二甲基甲酰胺中；通氮气30分钟后在氮气氛围下65℃反应10小时后将反应暴露在空气中并迅速放入冰浴中停止反应；反应得到的溶液用四氢呋喃稀释并用预冷的己烷沉淀，得到的沉淀通过离心收集，再次溶解在2mL的四氢呋喃中并用己烷沉淀，该纯化过程重复五次，最后冷冻干燥得到聚合物；

称取1g聚合物和过量的异氰酸酯丙烯酸乙酯、0.9wt％的4,4'-亚甲基双(2,6-二叔丁基苯酚)和0.1wt％的二月桂酸二丁基锡，并溶解在1mL的N,N'-二甲基甲酰胺中，40℃反应36小时后用预冷的乙醚沉淀两次，抽滤并真空干燥2小时得到双键功能化的聚N-异丙基丙烯酰胺聚合物。

2.根据权利要求1所述的细胞内构筑温度响应性聚集体的材料，其特征在于，所述材料还包括信号分子和/或药物分子，所述信号分子和/或药物分子连接在响应性多肽上。

3.根据权利要求2所述的细胞内构筑温度响应性聚集体的材料，其特征在于，所述信号分子为具有光声成像效应的分子、具有极性响应荧光效应分子或具有近红外荧光效应的分子中的任意一种。

4.根据权利要求3所述的细胞内构筑温度响应性聚集体的材料，其特征在于，所述具有光声成像效应的分子为紫红素-18卟啉类化合物。

5.根据权利要求3所述的细胞内构筑温度响应性聚集体的材料，其特征在于，所述具有极性响应荧光效应分子为4-(N,N-二甲氨基磺酰)-7-氟-2,1,3-苯并恶二唑类化合物。

6.根据权利要求3所述的细胞内构筑温度响应性聚集体的材料，其特征在于，所述具有近红外荧光效应的分子为花菁类化合物。

7.根据权利要求6所述的细胞内构筑温度响应性聚集体的材料，其特征在于，所述花菁类化合物为Cy5、Cy6或Cy7中的任意一种或至少两种的组合。

8.根据权利要求7所述的细胞内构筑温度响应性聚集体的材料，其特征在于，花菁类化合物为Cy7。