[发明专利]一种肝癌早期检测试剂盒的制备方法在审
| 申请号： | 201710355802.8 | 申请日： | 2017-05-18 |
| 公开（公告）号： | CN107271661A | 公开（公告）日： | 2017-10-20 |
| 发明（设计）人： | 焦绪栋;李文军;秦松 | 申请（专利权）人： | 中国科学院烟台海岸带研究所 |
| 主分类号： | G01N33/533 | 分类号： | G01N33/533;G01N33/577;G01N33/574 |
| 代理公司： | 深圳市科进知识产权代理事务所(普通合伙)44316 | 代理人： | 赵勍毅 |
| 地址： | 264003 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 肝癌 早期 检测 试剂盒 制备 方法 | ||
1.一种肝癌早期检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将肝癌表面抗原用PBST溶液配制成浓度为0.1-100ng/mL的肝癌表面抗原溶液，置于4-6℃备用；
将抗所述肝癌表面抗原的单克隆抗体用PBST溶液配制成浓度为5-10μg/mL抗肝癌表面抗原的单克隆抗体溶液，置于4-6℃备用；
将荧光酶标板用所述抗肝癌表面抗原的单克隆抗体溶液在4-6℃包被16-20小时，弃去溶液；
将所述荧光酶标板用PBST溶液冲洗；
将所述荧光酶标板采用含有质量分数为5％的脱脂牛奶或小牛血清白蛋白的PBST溶液在4-6℃进行非结合位点的封闭；
将所述荧光酶标板用PBST溶液冲洗；
在所述荧光酶标板中，每孔中加入所述肝癌表面抗原溶液，于20-24℃孵育1-2小时；
将所述荧光酶标板用PBST溶液冲洗；
在所述荧光酶标板中，每孔中加入生物素化的抗肝癌表面抗原的单克隆抗体的PBST溶液，于20-24℃孵育1-2小时；
将所述荧光酶标板用PBST溶液冲洗；
在所述荧光酶标板中，每孔加入重组藻蓝蛋白亚基的PBST溶液，于20-24℃孵育1-2小时；
将所述荧光酶标板用PBST溶液冲洗，得到所述肝癌早期检测试剂盒。
2.如权利要求1所述的肝癌早期检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述PBST溶液包含有20mM KH2PO4、100mM Na2HPO4·12H2O、1.37M NaCl、27mMKCl和质量分数为0.05％的吐温20，pH为7.4。
3.如权利要求1所述的肝癌早期检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述肝癌表面抗原为AFP或CEA。
4.如权利要求1所述的肝癌早期检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述荧光酶标板为96孔板或48孔板。
5.如权利要求1所述的肝癌早期检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述重组藻蓝蛋白亚基包括藻胆蛋白蛋白亚基、色基、麦芽糖结合蛋白、链霉亲和素核心蛋白。
6.如权利要求1所述的肝癌早期检测试剂盒的制备方法，其特征在于，将荧光酶标板用所述抗肝癌表面抗原的单克隆抗体溶液在4-6℃包被16-20小时，弃去溶液的步骤中，所述抗肝癌表面抗原的单克隆抗体溶液的用量为200-250μL。
7.如权利要求1所述的肝癌早期检测试剂盒的制备方法，其特征在于，在所述荧光酶标板中，每孔中加入所述肝癌表面抗原溶液，于20-24℃孵育1-2小时的步骤中，所述肝癌表面抗原溶液的用量为100μL。
8.如权利要求1所述的肝癌早期检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述生物素化的抗所述肝癌表面抗原的单克隆抗体溶液的终浓度为5-10μg/mL，用量为100μL。
9.如权利要求1所述的肝癌早期检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述重组藻蓝蛋白亚基的PBST溶液的终浓度为30-50μg/mL，用量为100μL。
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