[发明专利]香椿离体组织快速繁殖的方法

说明书

技术领域

本发明涉及林业生物技术领域，具体而言，涉及香椿离体组织快速繁殖的方法。

背景技术

香椿[Toona sinensis(A.Juss)Roem]属楝科多年生落叶乔木，喜阳光，适宜生长在昼夜温差大及肥沃的沙质土壤中。香椿原产我国中部，目前在全国很多地方已大面积栽培，主要分布在黄河流域和长江流域之间，尤以河北、山东栽种最多。香椿生长迅速、树干通直且材质花纹美观，既可用作速生材，又是上等的木生蔬菜，具有很高的营养价值、药用价值和食疗价值；另外，香椿的芽和种子等也可作为工业原料。

香椿叶浸提液活性成分的分析结果表明，其含有多种生物活性物质，包括没食子酸(gallic acid)、芦丁(rutin)、槲皮苷(quercitin)、儿茶酚(catechin)、表儿茶酚(epicatechin)、棕榈酸(palmitic acid)、油酸(oleicacid)、亚油酸(linoleic acid)、亚麻酸(linolenic acid)、β-谷甾醇混合物(a mixture of β-sitosterol)、豆甾醇(stigmasterol)、β-谷甾醇糖苷(β-sitosteryl-glucoside)、榈酸乙酯(ethyl gallate)、二十碳酸乙酯、正二十六烷醇、槲皮素、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、5,7-二羟基-8-甲氧基黄酮、杨梅素、杨梅苷等，这些化合物具有较高的药用与保健价值。

此外，香椿作为我国传统的名贵木本蔬菜，除了色香味俱佳外，还含有丰富的营养成分。据报道，1kg香椿嫩芽含蛋白质98g、脂肪8g、糖类72g、胡萝卜素90mg、维生素B₁ 12mg、维生素B₂ 1.3mg、维生素C 1.15g、钙1.1g、磷1.2g以及铁34mg。香椿所含营养成分居西红柿、甜椒、黄瓜、大白菜、甘蓝、菠菜、芹菜、萝卜、胡萝卜等主要蔬菜之首。同时，香椿芽可鲜食、炒食、凉拌、油炸、腌制以制作成不同的食品，深受广大群众喜爱。

虽然香椿作为食材两用的优良树种具有重要的经济价值，但在自然条件下，人们通常用播种、扦插育苗、埋根、分蘖等无性繁殖方法进行香椿的繁殖。然而，这些方法往往具有繁殖系数低、速度慢等缺点。同时，香椿芽生产受季节性影响明显，采收期短，仅限于春季的采收，因此传统的栽培生产很难满足生产需要，不利于快速繁殖和优良品种的选育推广栽培。

植物生物技术的发展，尤其是细胞工程和基因工程理论和实践的突破，为快速繁殖优良品种、改良品种和培育新品种提供了新的途径。其中，植物组织培养是快速繁育良种的重要策略手段之一。植物组织培养的理论依据是植物细胞的全能性。1902年，德国植物学家Gottlieb Haber landt提出了离体细胞培养的概念，并首次将分离的完全分化的细胞进行了组织培养试验。之后Skoog和Miller提出了激素控制器官形成的概念，使植物组织培养再生体系建立的研究达到了一个新水平。

目前，植物组织培养的应用和研究主要涉及到花卉、药用植物、农林蔬菜等方面。木本植物由于普遍存在生长周期较长，体细胞中含有较多的多酚类物质易导致植物材料褐化，短期经济效益较低，科研难度较大等现象，其组织培养研究相对较少。香椿作为我国特有的木本类蔬菜植物具有重要的开发及应用价值，尽管国内已有一些学者对其离体培养及快速繁殖进行了研究，但香椿在离体快繁中通常会出现愈伤分化困难，褐化严重，分化芽再生植株不易，移栽存活率低的问题。因此本研究以凉都香椿为材料，经过长期研究，探索了一种适于香椿的组织再生培养技术，可为推动地区产业化经济发展提供参考。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种香椿离体组织快速繁殖的方法，本发明方法能够有效解决香椿传统育种过程中周期长、繁育系数低、耗时费力等技术问题，为香椿的快速繁殖、良种培育提供理论保障。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种香椿离体组织快速繁殖的方法，所述方法包括如下步骤：

a)无菌外植体获取

将香椿种子冲洗后浸种，然后消毒，播撒于种子萌发培养基中进行培养，得到无菌幼苗，然后将无菌幼苗进行剪切处理，分别得到无菌幼苗叶片切块以及无菌幼苗下胚轴切段；

摘取香椿新发幼叶以及新发幼嫩枝条，并冲洗、消毒，然后分别进行剪切处理，分别得到成熟组织叶块以及成熟组织茎段；

b)愈伤诱导及植株再生