[发明专利]香椿离体组织快速繁殖的方法

权利要求书

1.一种香椿离体组织快速繁殖的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

a)无菌外植体获取

将香椿种子冲洗后浸种，然后消毒，播撒于种子萌发培养基中进行培养，得到无菌幼苗，然后将无菌幼苗进行剪切处理，分别得到无菌幼苗叶片切块以及无菌幼苗下胚轴切段；

摘取香椿新发幼叶以及新发幼嫩枝条，并冲洗、消毒，然后分别进行剪切处理，分别得到成熟组织叶块以及成熟组织茎段；

b)愈伤诱导及植株再生

分别将无菌幼苗叶片切块、无菌幼苗下胚轴切段、成熟组织叶块和成熟组织茎段接种于愈伤诱导培养基中，待愈伤组织形成后，转移至愈伤分化培养基中继续培养至出现分化芽；然后，将分化芽从愈伤组织上剥离，并接入生根培养基中继续培养；

c)再生组织移栽

选取长出不定根的试管苗，移出栽培室，并进行炼苗；然后，移栽至灭菌基质中。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a)中香椿种子的消毒为依次经酒精消毒和升汞消毒；

优选的，所述酒精消毒为采用75％酒精溶液进行消毒，并消毒20s；

优选的，所述升汞消毒为采用0.1％升汞溶液进行消毒，并消毒8min。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a)中所述种子萌发培养基为添加有GA₃、NAA、蔗糖以及琼脂的1/2MS基本培养基；

优选的，所述种子萌发培养基中GA₃的含量为0.5mg/L，NAA的含量为0.05mg/L，蔗糖的含量为0.3％，琼脂的含量为7g/L。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a)中所述培养的温度为25±5℃，光照时数为12h，光照强度为1000-2000lx。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a)中香椿新发幼叶以及新发幼嫩枝条的消毒为依次经酒精消毒和升汞消毒；

优选的，所述酒精消毒为采用75％酒精溶液进行消毒，并消毒45s；

优选的，所述升汞消毒为采用0.1％升汞溶液进行消毒，并消毒8～10min。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤b)中所述愈伤诱导培养基为添加有TDZ、NAA、蔗糖以及琼脂的MS基本培养基；

优选的，所述愈伤诱导培养基中TDZ的含量为0.15mg/L,NAA的含量为0.3mg/L，蔗糖的含量为0.3％，琼脂的含量为7g/L。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤b)中所述愈伤分化培养基为添加有6-BA、KT、NAA、蔗糖以及琼脂的MS基本培养基；

优选的，所述愈伤分化培养基中，6-BA的含量为0.1mg/L，KT的含量为0.5mg/L，NAA的含量为0.1mg/L，蔗糖的含量为0.3％，琼脂的含量为7g/L。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤b)中所述生根培养基为添加有NAA、蔗糖以及琼脂粉的1/2MS基本培养基；

优选的，所述生根培养基中，NAA的含量为0.5mg/L，蔗糖的含量为0.2％，琼脂粉的含量为6g/L。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤c)中所述基质为经过灭菌的腐殖质和碎炉渣混合基质；

优选的，基质中腐殖质和碎炉渣的质量为3:2。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤c)中进行移栽后，幼苗前期在适当遮荫的条件下培育，然后在自然光照条件下培育，并定期灭菌；

优选的，幼苗前期遮荫培育过程中，环境的湿度首先保持在85～95％，然后逐步降低至70％；

优选的，所述定期灭菌为采用40％多菌灵800倍液进行灭菌；

更优选的，所述定期灭菌为每隔5～7天进行一次灭菌，并灭菌2～3次。