[发明专利]UPLC-MS/MS联用检测人血浆和/或脑脊液中奥希替尼的药物浓度

说明书

本文涉及UPLC‑MS/MS联用检测人血浆和/或脑脊液中奥希替尼的药物浓度。本文提供通过超高效液相色谱串联质谱法(UPLC‑MS/MS)测定人血浆和/或脑脊液中奥希替尼的药物浓度的方法，其中所述方法采用含甲酸的甲酸铵水‑甲酸乙腈作为流动相进行。本发明的方法的特异性好、灵敏度高，血浆样品中奥希替尼在2～500ng·ml^‑1和脑脊液样品中0.5～20ng·ml^‑1范围内线性较好，已经应用于临床药代动力学样本的检测。

技术领域

本发明涉及检测药物浓度的方法。具体而言，本发明涉及通过超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定人血浆和/或脑脊液中奥希替尼(AZD9291)的药物浓度的方法。

背景技术

引言

肺癌作为全球范围发病率和死亡率最高的肿瘤之一，每年有180万的新发病例以及150万的死亡病例[1]。在肺癌患者疾病进展中，有约40％-50％的患者进展到脑转移。脑转移转移包括了脑实质转移和脑膜转移。有脑转移的肺癌患者通常有更差的生存质量，影响了患者的总生存时间[2]。

表皮生长因子受体广泛分布于哺乳动物上皮细胞、成纤维细胞、胶质细胞、角质细胞等细胞表面，EGFR信号通路对细胞的生长、增殖和分化等生理过程发挥重要的作用。大量的临床试验证实吉非替尼、厄洛替尼、阿法替尼和埃克替尼等表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)在PFS、生活质量以及耐受性方面与传统化疗相比均具有显著优势，奠定了EGFR-TKI在EGFR基因敏感突变阳性晚期NSCLC治疗中的地位[3-5]。EGFR基因敏感突变的发生率具有明显的种族差异，高加索晚期肺腺癌患者只有17％，而我国患者却高达50.2％[6]，意味着我国有更多的患者可以接受EGFR-TKI治疗。同时，研究结果也表明一代和二代的EGFR-TKI的治疗脑转移的患者中取得了很好的疗效[7]。然而，EGFR-TKI治疗过程中的耐药是普遍存在的问题，T790M突变是发生耐药最主要的原因。奥希替尼(AZD9291)是一种新型的三代的EGFR-TKI药物，用于治疗EGFR T790M突变的非小细胞肺癌患者[8]。奥希替尼(AZD9291)的结构不同于所有其它目前已经批准用于临床的EGFR-TKIs。最近的研究也证实了其在脑转移患者中的疗效。在AUR3的临床试验中，144例具有脑转移的患者，接受奥西他滨的患者的无疾病进展生存期的中位时间要长于接受铂类加培美曲塞治疗的患者[9]。

检测血液或其他生物样本中的药物浓度是药动学、药效学研究和临床治疗的基础。用于检测血浆药物浓度的方法应当具备高灵敏度、能够快速获得结果和能够使用少量样品进行。然而，由于血液中存在包括磷脂、蛋白等多种组份，检测易受基质效应等各种因素的影响。如何最大可能减少基质效应，尽可能获得血液中药物的准确浓度，是本领域必须进行深入研究的课题。

HPLC法是目前检测血药浓度常用的方法，应用范围广泛。但是，由于使用色谱柱进行分离耗费时间较长、灵敏度较低，并不适用于高通量的生物样品分析。

超高效液相色谱质谱联用(Ultra Performance Liquid Chromatography，UPLC-MS/MS)法提高了分析通量，节省了样品和溶剂分析时间。然而，UPLC-MS/MS对流动相，色谱柱，样品前处理，质谱接口，数据采集系统都提出了特别的要求。尽管对转换方法进行了一些研究，传统的高效液相色谱HPLC的条件不能直接应用于UPLC-MS/MS，需要对包括样品前处理、内标、流动相、色谱柱选择、质谱条件设置等各项条件进行大量试验，才能实现UPLC-MS/MS快速检测分析。例如，周新等人的研究(HPLC与UPLC色谱条件转换方法研究，分析试验室，第27卷第4期，2008年4月)表明直接将HPLC条件应用于UPLC，不能达到对待测物质分离分析的目的；而且质谱检测与色谱检测不同，对于流动相组成、流速等多种方面需要额外的注意，因此对实验条件包括例如流动相选择等进行具体深入研究才能获得分离状况良好的UPLC-MS/MS方法。