[发明专利]一种套叶兰离体培养快繁方法

说明书

本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种套叶兰离体培养快繁方法，包括依次进行的如下步骤：获取套叶兰植株的外植体、外植体诱导培养、根状茎的增殖培养、根状茎的分化培养、壮苗培养、炼苗和移栽；所述的外植体诱导培养操作的外植体诱导培养基包括：KC培养基、0.5～1.0mg/L 6‑BA、0.01～0.05mg/L ZT、0.1～1.0mg/L IBA、15～25g/L蔗糖、3.5～5.0g/L琼脂、30～50ml/L椰子汁，pH为5.4～5.8，本发明选择套叶兰新生营养芽为外植体，经诱导培养、增殖培养、分化培养、壮苗培养、炼苗和移栽等步骤，其诱导率达到了68％以上，成活率达到了94％以上，实现了套叶兰的组培快繁，从而实现了本发明的目的。

技术领域

本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种套叶兰离体培养快繁方法。

背景技术

“竹有节而啬花。梅有花而啬叶，松有叶而啬香。惟兰独并有之。”，这是人们对有“君子花”之称的兰花人格化评价。兰花不仅有自然美的欣赏上达到了至高无上的境界，而且涵盖了所有花卉的优秀品格而成为最瑧完美的“人格花”，但近年来，由于人们的无度采挖，导致其数量锐减，包括套叶兰(Hippeophyllum sinicum)在内多种兰花植物已处于濒危状态。套叶兰为兰科(Orchidaceae)套叶兰属(Hippeophy Schltr.)的一种附生兰。套叶兰属约有6种，分布于马来西亚、印度尼西亚、菲律宾、新几内亚岛、所罗门群岛以及我国亚热带地区，我国产有2种，分别为套叶兰(H.sinicum)和宝岛套叶兰(H.pumilum)，分别分布于甘肃南部白龙江流域和台湾中部。

套叶兰与春兰等国兰属于长苞组，均为附生草本，具长的横走根状茎，根茎上以一定的距离着生叶簇，茎较短，包于叶基之内。花期11月，花形与春兰相似，呈黄金色，其香味幽远，开花时节十里飘香，深受人们喜爱，具有有较高的园艺观赏价值。目前套叶兰以分株繁殖为主，繁殖效率低，种苗匮乏，导致其未得到广泛开发应用，绝大部分套叶兰处于野生状态，但常被无度采挖和交易，加之生境地的恶化，数量锐减，处于近濒危状态，因此很有必要建立套叶兰的离体培养快繁体系。

发明内容

本发明的目的是提供一种套叶兰离体培养快繁方法，本发明选择套叶兰新生营养芽为外植体，经诱导培养、增殖培养、分化培养、壮苗培养、炼苗和移栽等步骤，其诱导率达到了68％以上，成活率达到了94％以上，实现了套叶兰的组培快繁，从而实现了本发明的目的。

本发明提供的技术方案为：一种套叶兰离体培养快繁方法，包括依次进行的如下步骤：获取套叶兰植株的外植体、外植体诱导培养、根状茎的增殖培养、根状茎的分化培养、壮苗培养、炼苗和移栽；

所述的外植体诱导培养操作的外植体诱导培养基包括：KC培养基、0.5～1.0mg/L6-BA、0.01～0.05mg/L ZT、0.1～1.0mg/L IBA、15～25g/L蔗糖、3.5～5.0g/L琼脂、30～50ml/L椰子汁，pH为5.4～5.8。

在上述的套叶兰离体培养快繁方法中，所述的外植体诱导培养操作的方法为：将采集得到的作为外植体的叶兰植株消毒后纵向切成0.3～0.5cm的芽点，接种到诱导培养基中暗培养90～120天即可诱导形成长度为2～3cm的根状茎。

在上述的套叶兰离体培养快繁方法中，所述的根状茎的增殖培养操作所用到的增殖培养基包括：MS、0.1～0.5mg/L 6-BA、0.05～0.1mg/L NAA、0.01～0.05mg/L KT、15～25g/L蔗糖、3.5～4.5g/L琼脂、0.1～0.2g/L活性炭、10～20ml/L椰子汁，pH为5.4～5.8。

在上述的套叶兰离体培养快繁方法中，所述的根状茎的增殖培养操作具体为：将外植体诱导培养操作得到的根状茎切成长0.5～1.0的茎段并接种到增殖培养基中培养40～50天即可获得长度为4～6cm的根状茎。