[发明专利]一种无标记荧光检测胰蛋白酶的超分子组装体及制备方法

权利要求书

1.一种无标记荧光检测胰蛋白酶的超分子组装体，其特征在于该超分子组装体是由季铵型阳离子双子表面活性剂与肝素钠通过静电作用形成的复合物水溶液，所述的季铵型阳离子双子表面活性剂化学结构式为：

或 ，

其中n=12，14，16。

2.权利要求1所述的一种无标记荧光检测胰蛋白酶的超分子组装体的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

Ⅰ 季铵型阳离子双子表面活性剂的临界胶束浓度CMC的测定；

将季铵型阳离子双子表面活性剂溶解于浓度为10 mM，pH 8.0的磷酸盐缓冲溶液中，配制浓度范围为10^-2 mol L^-1~10^-7 mol L^-1的梯度溶液；用微量进样器移取10~50 µL尼罗红的丙酮溶液，加入到梯度溶液中，使梯度溶液中尼罗红的终浓度为10^-6 mol L^-1，以40~100kHz敞口超声波处理10~60分钟，静置0.5~12小时后进行荧光发射光谱检测；以发射峰强度为纵坐标，表面活性剂的对数浓度为横坐标作图，得到S形曲线，曲线上第一个转折点对应浓度即为双子表面活性剂的临界胶束浓度CMC；

Ⅱ 肝素钠浓度的测定：

将肝素钠溶解于浓度为10 mM，pH 8.0的磷酸盐缓冲溶液中，配制浓度范围为10~10^-5 mg mL^-1的梯度溶液；根据步骤I得到的季铵型阳离子双子表面活性剂的临界胶束浓度CMC，确定阳离子双子表面活性剂的浓度为CMC的 0.3~1.6倍，按照体积比1:1加入到肝素钠的梯度溶液中；用微量进样器移取10~50 µL尼罗红的丙酮溶液，加入到混合溶液中，使混合溶液中尼罗红的终浓度为10^-6 mol L^-1，以40~100kHz敞口超声波处理10~60分钟，静置0.5~12小时后进行荧光发射光谱检测；以发射峰强度为纵坐标，肝素钠的对数浓度为横坐标作图，得到S形曲线，曲线上第二个转折点对应浓度即为形成稳定超分子组装体的肝素钠浓度；

Ⅲ 超分子组装体溶液的配制：

按照步骤II中确定的季铵型阳离子双子表面活性剂与肝素钠的配比，将两种溶液按照体积比1:1混合；用微量进样器移取10~50 µL尼罗红的丙酮溶液，加入到混合溶液中，使混合溶液中尼罗红的终浓度为10^-6 mol L^-1，以40~100 kHz敞口超声波处理10~60分钟，静置0.5~12小时后得到超分子组装体溶液。