[发明专利]一种检测5‑羟吲哚乙酸试剂及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测5-羟吲哚乙酸的试剂及试剂的制备方法，特别是采用乳胶增强免疫比浊法检测体液(血清、血浆或尿液等)中的5-羟吲哚乙酸的试剂及相应的制备方法，可广泛应用在医学及生物化学技术领域。

背景技术

5-羟吲哚乙酸(5-hydroxyindole acetic acid,5-HIAA)为吲哚乙酸的衍生物,5-羟吲哚乙酸是5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)在单胺氧化酶(Monoamine oxidase,MAO)作用下转化而来的,是人体内重要的活性物质。5-HIAA是哺乳动物尿中的正常组成成分,同时也存在于脑脊液、血小板等体液组织中,最终由尿中排出。临床上将5-HIAA的过度分泌作为类癌瘤的最为特异性的生化指征。类癌(carcinoid)又称类癌瘤(carcinoid tumor),是一组发生于胃肠道和其他器官嗜铬细胞的神经内分泌肿瘤,其临床、组织化学和生化特征可因其发生部位不同而异,此种肿瘤能分泌5-HT、激肽类、组织胺等生物学活性因子,引起血管运动障碍、胃肠症状、心脏和肺部病变等,称为类癌综合征(carcinoid syndrome)。因为类癌细胞释放大量的5-HT,而5-HT进一步代谢生成5-HIAA,所以类癌患者尿中5-HIAA排泄量显著增高,一般在156.9～3 138μmol/24h(正常参考值10.5～47.1μmol/24h尿),因此24h尿中5-HIAA含量检测是诊断类癌的有力证据,且尿中5-HIAA量与类癌综合征状出现的频率和严重程度有直接关系。Allen等还发现血浆中5-HIAA含量可以作为监视类癌患者的一个非常有用的生物标志物。早在1976年,sberg报道脑脊液中5-HIAA降低与自杀之间存在相关性。Stanley等1983年证明5-HIAA可以作为自杀患者的生物标志物，且5-HIAA水平的下降与自杀几率之间有相关性。另外5-HIAA含量增高可作为妊娠性高血压、肝硬化、急性阑尾炎筛查的一个有用生物标志物。综上所述,5-HIAA是人体内重要的神经递质代谢产物,增高或降低都会间接反映体内某些病理改变。同时随着对其检测方法研究的日益发展,5-HIAA与临床相关疾病的研究将会得到进一步的进展,5-HIAA将会为临床的诊断和治疗提供越来越可靠的依据

目前检测5-HIAA常用的实验室方法有比色法、放射免疫学分析法(RIA)、化学发光免疫分析法(CLIA)、高效液相色谱法(HPLC)、质谱法(MS)、酶联免疫法(ELISA)。其中比色法操作复杂,且在萃取过程中容易造成5-HIAA的损失,敏感性较低。放射免疫学分析法(RIA)检测耗时长(19～22h)，而且有放射性元素的污染，标记物稳定性差，废弃物难以处理而使其受到限制。化学发光免疫分析法(CLIA)是利用化学发光物质经催化剂催化和氧化剂氧化，形成一个激发态的中间体，这种激发态的中间体回到稳定基态时，发出光子，利用发光信号测量仪测量光子数，从而间接检测5-HIAA的浓度。目前市场上有管式和板式两种试剂盒，但此法存在吖啶酯、鲁米诺、异鲁米诺直接标记抗体的发光效率低，标记物不稳定的缺点；而且这种直接标记法属于瞬间发光型，很难保证测试结果的稳定性和重复性，还需要特殊的检测仪器，不便于常规实验室开展。而利用生物素-亲和素系统检测5-HIAA的电化学发光免疫分析法、高效液相色谱法(HPLC)和质谱法(MS)，均需要配备昂贵的全自动电化学发光检测仪、高效液相色谱和质谱仪，常规实验室和基层实验室无法开展，而且给患者带来不必要的费用，增加患者负担，不符国家医改相关政策。酶联免疫法(ELISA)自动化程度不高，且受人为因素影响较大，重复性差，整个反应检测时间也很长(至少需要40分钟)。

中国专利(公开(公告)号CN104390975A)，利用试剂中的亚汞离子与5-羟吲哚乙酸反应产生红色、类红色沉淀，从而据此初步判断是否携带癌细胞，此方法只能定性，不能定量检测，更不能自动化操作，并且易受干扰，特异性也不一定好。再如中国专利(公开(公告)号CN105131106A)采用均相酶免疫法检测5-羟基吲哚乙酸，虽然可以实现在全自动生化分析仪上进行高通量、快速化的检测。但是该方法使用的酶标偶联物为葡萄糖-6-磷酸脱氢酶-半抗原酶标偶联物，此酶偶联物热稳定性差，试剂的有效期短。

发明内容