[发明专利]液体活检血液中循环肿瘤核酸和细胞的稳定剂及其采血管

说明书

本发明提供一种液体活检血液中循环肿瘤核酸和细胞的稳定剂及其采血管。以重量份计，该稳定剂包括20‑100份的防腐剂、5‑50份的抗氧化剂、1‑35份的抗凝剂、5‑20份的pH稳定剂、5‑20份的酶抑制剂、0.1‑10份的细胞凋亡抑制剂、5‑25份的自由基捕获剂和1‑10份的代谢抑制剂。本发明提供的液体活检血液中循环肿瘤核酸和细胞的稳定剂及其采血管，能够运用一步法进行相关样品的快速分离，能够有效保存胎儿游离核酸，防止循环肿瘤核酸交联性损伤并保证野生型基因的完整性，防止细胞裂解及其血液基因组核酸的释放，实现癌症患者的血样中的循环肿瘤细胞、淋巴细胞以及循环肿瘤核酸的常温保存与运输。

技术领域

本发明属于液体活检技术领域，具体涉及一种液体活检血液中循环肿瘤核酸和细胞的稳定剂及其采血管。

背景技术

液体活检，既有极高的科研价值，又具备助力推进精准医疗临床实践的巨大潜能。它可用于癌症早期筛查、诊断、监控、治疗方案指导和疗效评估等众多领域，液体活检的优势使其成为最具发展潜力的肿瘤诊疗手段。游离核酸作为新型的医疗诊断标志物，与肿瘤学、产前遗传学诊断的发展有着非常密切的联系，循环肿瘤主要来源于实体肿瘤的原发病灶从肿瘤组织中脱落进入到血液循环中，并最终称为肿瘤的早期诊断、个性化治疗、疗效检测的标志性检测物质。恶性肿瘤的高度异质性使不同个体之间存在药效的差异，肿瘤不断进化，在不同阶段表现出不一样的生物学特征，给临床诊治造成了很大困扰。侵袭与转移能力高的肿瘤细胞扩散至循环血后，在特定的阶段及环境中种植于身体某些部位，不断增殖形成转移瘤，且表现出与原发肿瘤不一样的生物学特征。在抗肿瘤治疗中，转移瘤克隆进化持续发生，抗肿瘤治疗失败继而重演。相关研究表明游离DNA与肿瘤细胞DNA具有一致性，能全面的反应肿瘤细胞中遗传信息的变化，利用液体活检技术能克服常规肿瘤组织活检所无法突破的肿瘤异质性问题。通过循环肿瘤核酸检测，能帮助实时动态监测肿瘤原发灶及转移复发灶基因组信息，协助早期诊断、疗效监测和预后判断，也有助于靶向治疗适应证的评估。在遗传诊断领域，通过采集孕妇外周血，并提取血液中游离脱氧核糖核酸(cfDNA)并进一步分离出游离的胎儿脱氧核糖核酸(cffDNA)，结合下一代测序技术(NGS)，结合相关生物信息分析，对胎儿的遗传信息进行分析达到无创产前诊断的目的。

然而由于相关标记物在血液中的含量极低并且其在常温情况下降解速度快等特点加大了相关标记物获取的困难，并且相关血样在保存及运输的过程中都受到外界条件如地理、时间、空间、温度等条件的扰动，对血样造成了一定的破坏，加大了液体活检实施的困难。由此可见，液体活检的实施的关键在于相关生物样品的获取与保存的实现。

常规血样进行保存的稳定剂一般采用咪唑烷基脲等防腐剂，该类物质虽然能起到防腐功效，但会释放出甲醛等有害成分，容易攻击游离核酸，引起游离核糖核酸(cfRNA)交连成双键结构无法检测，游离脱氧核糖核酸(cfDNA)化学键被破坏，双链结构无法打开，无法进行扩增、诊断，不能够制成医学用采血管，无医学上的使用价值。

再者，在进行于癌症相关的液体活检测应用中，关键在于保证血样中游离脱氧核糖核酸(cfDNA)、循环肿瘤DNA(cfDNA)及野生型基因组的完整性，而现有液体活检中对血样进行保存的稳定剂，一般难以保证游离核酸不降解，在进行下游分析时，难以提供足量游离核酸用于分析；同时血样保存的常规稳定剂中自由基的存在，加速了核酸降解，而且能够杀死血液中的白细胞及癌细胞，无法满足液体活检的需求。

发明内容

为了解决现有血样保存稳定剂难以满足液体活检中游离脱氧核糖核酸(cfDNA)、循环肿瘤DNA(cfDNA)及野生型基因组的完整性及容易产生甲醛等有害成分等问题，本发明的目的在于提供一种符合医学标准的不含有甲醛等有害物质且能够用于液体活检血液中循环肿瘤核酸和细胞保存的稳定剂及其采血管。

本发明的目的通过以下技术方案得以实现：