[发明专利]土木香倍半萜内酯有效部位的制备方法及其在抗胰腺癌方面的应用

说明书

技术领域

本发明属于中药领域，具体是一种土木香倍半萜内酯有效部位的制备方法及其在抗胰腺癌方面的应用。

背景技术

菊科(Asteraceae)旋覆花属(Inula L.)植物约有100余种，主要分布于欧洲、非洲及亚洲，以地中海地区为主。我国旋覆花属有20余种和多个变种，其中一部分是广泛分布种；我国的特有种主要集中于西部和西南部。旋覆花属多个种植物常供药用。

土木香(Inula helenium L.)为菊科旋覆花属植物，在我国具有多年用药历史，现被我国2015版药典收载。土木香，味辛、苦、温，归肝、脾经，具有健脾和胃、行气止痛等功效，常用于胸胁、脘腹胀痛，呕吐泻痢，胸胁挫伤，岔气作痛，胎动不安等治疗。

土木香含有多个倍半萜内酯类成分，且为其指标性有效成分，2015版药典规定，土木香以干燥品计算，含土木香内酯及异土木香内酯的总和不得低于2.2％。迄今为止，虽然文献报道，对菊科旋覆花属植物进行了较系统的化学成分研究，已从该属多个种的药用植物中，提取、分离得到了一系列倍半萜内酯类化合物，并且鉴定了其化学结构；文献亦报道了多个倍半萜内酯类化合物的多种生物活性，如：驱虫作用，抗菌作用等。但迄今未有对菊科旋覆花属植物中含有的倍半萜内酯类成分的有效部位的研究报道，亦没有提供一种工艺科学合理，有效部位性能稳定、药效物质较明确、生物活性高的土木香倍半萜内酯有效部位的制备方法，及其在临床较难治疗的胰腺癌方面的应用。

目前，在提取溶剂及方法方面，文献“土木香化学成分的研究”(赵永明；土木香化学成分的研究；天然产物研究与开发；2009年第21卷)公开了土木香中倍半萜内酯类成分的提取方法，该研究用99％的乙醇回流提取。99％的乙醇在提取土木香脂溶性较强的倍半萜内酯方面具有明显优势，且能最大限度避免极性较大的非倍半萜内酯类杂质的引入，但99％的乙醇成本高，高浓度的乙醇亦不适合工业化生产，存在一定的技术缺陷。

文献“土木香内酯与异土木香内酯的提取与纯化工艺”(张乐；土木香内酯与异土木香内酯的提取与纯化工艺；天然产物研究与开发；2015年第27卷)公开了土木香主要倍半萜内酯的提取、纯化方法，包括用95％的乙醇加热回流提取。该法在一定程度上能高效提取出土木香中倍半萜内酯类成分，但回流提取能耗高，且可能对稳定性较差的倍半萜内酯类成分造成破坏，存在一定的技术缺陷。

在萃取溶剂及纯化方面，文献“土木香内酯与异土木香内酯的提取与纯化工艺”(张乐；土木香内酯与异土木香内酯的提取与纯化工艺；天然产物研究与开发；2015年第27卷)公开了土木香主要倍半萜内酯的提取、纯化方法，并优化了提取工艺。该方法在纯化主要指标性成分时，未对95％的土木香乙醇提取物进行萃取及粗分离，直接上硅胶柱分离，会引入大量非倍半萜内酯类成分，且影响硅胶的分离效能。

硕士论文“治疗IBS有效部位土木香总内酯的制备工艺及质量标准研究”(张乐；上海交通大学，2014级硕士生)公开了土木香总内酯的制备工艺，但其总内酯中包含的倍半萜内酯类成分较多，倍半萜内酯类成分为一类“天然迈克尔反应受体分子”，特别极性较大的该类成分易与体内一些关键蛋白、酶发生不可逆结合，存在潜在毒性，存在一定技术缺陷。

在土木香倍半萜内酯有效部位提取方法方面，冷浸法、回流提取法、超临界流体萃取法均有应用。冷浸法提取效率低，提取溶剂用量大；回流提取法可能会造成一些热敏性倍半萜内酯类成分的降解，能耗亦大；超临界流体萃取法提取效率高，但设备昂贵，高压下操作，亦对人员、厂房等要求高，会增加生产成本。

在土木香倍半萜内酯纯化工艺方面，硅胶柱层析法应用较多。该法对土木香倍半萜内酯的分离、纯化具有一定优势。文献报道的多是某些倍半萜内酯单体的分离、纯化方法，较少涉及土木香倍半萜内酯有效部位。有文献报道亦提到了利用硅胶柱层析纯化土木香总内酯，但该总内酯成分复杂，药效物质不明确。

在土木香倍半萜酯应用方面，文献报道多集中在驱虫、抗菌等方面。其在癌症治疗方面有报道，但以白血病为主，且较多文献报道主要集中在：土木香某倍半萜内酯单体体外对人源肿瘤细胞的生长抑制活性，药效物质明确的土木香倍半萜内酯有效部位，对较难治疗的人源胰腺癌细胞的抑制活性鲜有文献报道。

发明内容

本发明的目的是针对上述问题，提供一种科学合理，工艺操作简单的菊科旋覆花属植物土木香倍半萜内酯有效部位的制备方法。所述倍半萜内酯有效部位药效物质明确，纯度高，几个土木香内酯协同，符合中药多组分、多靶点协同发挥药效的优势及特点，其对胰腺癌的体外抑制活性亦预示其具有重要的应用价值。