[发明专利]一种重组人源III型胶原蛋白的纯化方法和制备方法

说明书

本发明公开了一种重组人源III型胶原蛋白的纯化方法和制备方法，涉及蛋白质提取技术领域。本发明公开的重组人源III型胶原蛋白的纯化方法通过在温度为65‑75℃条件下热处理由具有表达出重组人源III型胶原蛋白能力的重组酵母菌发酵得到的发酵液，有效地防止了发酵液中的重组人源III型胶原蛋白降解成小分子肽，并降低发酵液中内毒素的产生，大大地提高了重组人源III型胶原蛋白纯度，达到符合化妆品原料、医疗器械以及医用级的高纯度胶原蛋白；本发明公开的重组人源III型胶原蛋白的制备方法所制得的重组人源III型胶原蛋白纯度高、内毒素含量少，达到符合化妆品原料、医疗器械以及医用级的高纯度胶原蛋白的要求。

技术领域

本发明涉及蛋白质提取技术领域，具体而言，涉及一种重组人源III型胶原蛋白的纯化方法和制备方法。

背景技术

目前，胶原蛋白的来源主要分为：

动物源胶原蛋白传统提取法：通过用酸、碱水解法从动物结缔组织(猪皮、牛皮、驴、皮、鱼等)中提取但所得到的产品成分复杂。

类胶原蛋白的化学合成法：化学合成法提供了一条快速、高效的蛋白质制备途径，同时它能方便地引入非天然氨基酸，改变碳链骨架以及进行其它化学修饰来提高蛋白质活性，构建新蛋白。此项技术应用于类胶原蛋白的合成中，并利用其技术特点赋予类胶原蛋白新的生理功能。

胶原蛋白的重组表达：充分利用胶原蛋白的优良特性，避免动物来源产品的高风险，利用基因工程技术，选用各种宿主细胞，如转基因动物、转基因植物、昆虫细胞、细菌、酵母等生产重组人胶原蛋白和明胶，产品具有安全性好、重现性好、质量稳定等优点，解决了传统提取方法存在的诸如疯牛病病毒隐患等缺点，同时也改善了胶原蛋白的亲水性、免疫排异性等性能。

国内胶原蛋白厂商大多采用大肠杆菌发酵表达胶原蛋白，但是细菌表达系统普遍存在以下缺点：产生的致热源(例如内毒素)致使表达产物难以应用于临床；目的蛋白常以包涵体形式表达，致使产物纯化困难；原核表达系统的翻译后加工修饰体系不完善，表达产物的生物活性较低等。

发明内容

本发明的目的在于提供一种重组人源III型胶原蛋白的纯化方法，该纯化方法可防止蛋白降解、降低内毒素的产生，提高重组人源III型胶原蛋白的含量。

本发明的另一目的在于提供一种重组人源III型胶原蛋白的制备方法，该纯化方法可防止蛋白降解、降低内毒素的产生，提高重组人源III型胶原蛋白的含量。

本发明是这样实现的：

一种重组人源III型胶原蛋白的纯化方法，其包括：将由具有表达出重组人源III型胶原蛋白能力的重组酵母菌发酵得到的发酵液进行第一次热处理，得到变性液，上述第一次热处理的温度为65-75℃。

一种重组人源III型胶原蛋白的制备方法，其包括：培养具有表达出重组人源III型胶原蛋白能力的重组酵母菌，获取发酵液；上述发酵液按上述重组人源III型胶原蛋白的纯化方法进行纯化，得到重组人源III型胶原蛋白。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明提供的重组人源III型胶原蛋白的纯化方法，通过在温度为65-75℃条件下热处理由具有表达出重组人源III型胶原蛋白能力的重组酵母菌发酵得到的发酵液，有效地防止了发酵液中的重组人源III型胶原蛋白降解成小分子肽，并降低发酵液中内毒素的产生，大大地提高了重组人源III型胶原蛋白纯度，达到符合化妆品原料、医疗器械以及医用级的高纯度胶原蛋白。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。